Тема: Микробиологическая диагностика туберкулеза.

Протокол-отчет № 22 от ----

Тема: Микробиологическая диагностика туберкулеза.

Цель

Метод и его содержание

Полученные результаты

Выводы

Провести выделение, идентификацию исследуемой культуры из мокроты обследуемого с клиническим диагнозом: «туберкулез легких»,

Бактериологическое исследование по обнаружению и выделению предполагаемого возбудителя из мокроты больного с подозрением на туберкулез легких

1 этап. Готовится препарат: чашку Петри с мокротой помещаем на черную бумагу и препаровальными иглами отбираем гнойные комочки, перенесем их на середину предметного стекла и покроем вторым стеклом так, чтобы осталась свободной треть первого и второго стекол. Стекла раздвигаем в стороны, и получаем два «препарата-близнеца», которые фиксируем в пламени.

Окраска по методу Циля-Нильсена:

1. На препарат кладем фильтровальную бумажку и с избытком наливаем карболовый раствор фуксина Циля, который подогреем до появления паров. При подогревании следим, чтобы краска не закипела, а фильтровальная бумага не высыхала. Подогретый мазок оставим на 5 минут.

2. Снимаем бумажку и промываем препарат водой.

3. Обесцветим препарат в 5% растворе Н₂SО₄ в течение 3 минут.

4. Тщательно промоем водой.

5. Докрасим препарат 0,3 % водным раствором метиленового синего — 1 мин.

6. Промоем водой, высушим на открытом воздухе!

Обогащенную мокроту засевают на среду Левенштейна-Иенсена и инкубируют при 37°С 2-3 недели и более, т.к. микобактерии туберкулеза медленно размножаются.

2 этап. оцениваем результаты роста на среде Левенштейна-Иенсена культуры, выделенной из мокроты больного. Промикроскопируем готовый мазок из этой же культуры (окраска по Цилю-Нильсену).

Определение чувствительности к противотуберкулезным препаратам, которое проводится методом абсолютных концентраций. Для этого в среду Левенштейна-Иенсена перед свертыванием добавляют противотуберкулезные препараты. Интенсивность роста оценивается плюсами:

++++ - сплошной, сливной рост; +++ - более 100 колоний; ++ - от 50 до 100 колоний;

+ - от 20-50 колоний; ЕК - единичные колонии.

Культуру считают чувствительной к препарату, если выросло менее 20 колоний при обильном росте в контрольной пробирке и устойчивой, если выросло более 20 колоний.

3 этап. учитываем результаты посева культуры на среду с салициловым натрием.

I. Бактериологический метод

1 этап.

В мазке, окрашеным по методу Циля-Нильсена среди множества клеток и микроорганизмов, окрашенных синим цветом, обнаружены палочки красного цвета, расположенные скоплениями и поодиночке.

При люминесцирующем микрокопировании на препарате, окрашенным ауромином ОО, родамином С - обнаружены, светящиеся ярким золотисто-желтым светом палочки на темном фоне.

2 этап. На среде Левенштейна-Иенсена обнаружены морщинистые, цвета слоновой кости колонии, плотно сросшиеся с питательной средой (R-типа)

3 этап. Антибиотикограмма.

Стрептомицин ++++ R

Тубазид S

Этионамид S

Канамицин ++++ R

Этамбутол +++ R

Рифампицин S

Нет роста на среде с салициловым натрием.

II. Биопрепараты

Наименование	Что содержит	Для чего применяется	Как применяется
БЦЖ БЦЖ-М (Бацилла Кальметта и Герена)	Живая лиофильно высушенная культура апатогенного штамма микобактерий туберкулеза.	Для активной специфической профилактики туберкулеза	Вводится внутрикожно
туберкулин	Очищенный осажденный белковый фильтрат бульонной культуры микобактерий M. bovis	Для постановки кожно-аллергической пробы (реакция Манту)

обнаружены кислотоустойчивые палочки, предположительно микобактерии

____________________

обнаружены характерные колонии микобактерий на среде Левенштейна-Иенсена

___________________

Для рациональной антибиотикотерапии, можно применить рифампицин, тубазид, этионамид,

Дата добавления: 2015-11-04