1.2. Срок годности лекарственного средства устанавливается экспериментально при хранении в течение определенного времени в условиях и упаковке, регламентируемых нормативным документом, и, по мере накопления данных, он может быть изменен как в сторону увеличения, так и в сторону уменьшения.
Срок годности на готовые лекарственные формы устанавливают независимо от сроков годности основного вещества.
1.3. Первоначальный срок годности лекарственного средства, который, как правило, должен быть не менее двух лет, определяет предприятие-изготовитель (разработчик) при подготовке проекта нормативной документации.
После регистрации лекарственного средства и начала промышленного выпуска предприятие-изготовитель (разработчик) обязано продолжить работы по изучению стабильности лекарственного средства с целью подтверждения или уточнения его срока годности.
Не рекомендуется устанавливать сроки годности более 5 лет, даже если результаты изучения стабильности позволяют это сделать.
1.4. Изменение сроков годности лекарственных средств или условий хранения оформляется как изменение нормативной документации и утверждается в установленном порядке.
1.5. Начальной датой отсчета срока годности лекарственного средства является дата его выпуска.
1.6. Условия хранения лекарственных средств, предписанные нормативной документацией, должны соблюдаться не только при хранении, но и при транспортировке и при продаже. Особые условия хранения и транспортировки лекарственного средства должны быть указаны при маркировке упаковки.
2. Порядок определения первоначального срока годности
лекарственного средства
2.1. Работу по определению срока годности лекарственного средства предприятие-изготовитель (разработчик) начинает на лабораторных или опытно-промышленных образцах.
2.2. В основу определения сроков годности должно быть положено изучение стабильности лекарственного средства с использованием химических и физико-химических методов анализа, указанных в общих фармакопейных статьях действующей Государственной фармакопеи, а также, в случае необходимости, других специальных методов исследований (например, биологических методов анализа, фармакологических испытаний).
2.3. Изучение стабильности лекарственных средств должно установить наиболее вредные влияния внешних факторов (высокие или низкие температуры, взаимодействие с влагой, кислородом и другими компонентами воздуха, светочувствительность и т.п.) в зависимости от времени и условий их воздействия. При этом обязательно определяют:
а) степень изменения физических и химических свойств лекарственного средства (внешний вид, температура плавления или кипения, химический состав или количественное содержание компонентов и т.д.) при нагревании и охлаждении, при взаимодействии с влагой, кислородом и другими компонентами воздуха, при воздействии прямого и рассеянного света;
б) гигроскопичность лекарственного средства;
в) токсичность или другой показатель вредного физиологического воздействия на организм.
Примечания
1. Перечень свойств лекарственного средства и внешних факторов, которые исследуют при изучении стабильности, определяет предприятие-изготовитель (разработчик), которое может также включить и специальные физико-химические и аналитические характеристики изучаемых образцов (спектральные, радиофизические, хроматографические и др.) в соответствии с общими фармакопейными статьями действующей Государственной фармакопеи, а в случае необходимости дополнительно использовать и другие методы (биологические методы анализа и фармакологические испытания).
2. При необходимости проводится изучение зависимости стабильности лекарственного средства от качества полупродуктов его производства.
3. При исследовании стабильности лекарственной формы одновременно с изучением устойчивости активного вещества оценивают как его совместимость со вспомогательными веществами, так и эффективность используемых антиоксидантов, консервантов и др.
4. Для некоторых лекарственных форм (растворы, суспензии, мази, эмульсии и др.) должны быть предусмотрены исследования по изучению влияния на их стабильность отрицательных температур (циклы замораживания и оттаивания).
5. Если для лекарственных средств, которые должны быть разведены или растворены (восстановлены) перед применением (сухие лекарственные формы для инъекций, концентраты для приготовления суспензий для внутривенного введения и др.), предусматривается непродолжительное хранение готового (восстановленного) препарата (обычно 10-14 сут.), должны быть представлены дополнительные данные по стабильности последнего.
2.4. На основании изучения свойств лекарственного средства устанавливают оптимальные требования к первичной и вторичной упаковке и условиям хранения.
При этом должны быть сформулированы требования к материалу первичной и вторичной упаковки, герметичности, защите от действия света, наличию остаточного количества воздуха и его компонентов в первичной упаковке после укупорки или запаивания, а также необходимые ограничения по температурному режиму хранения.
2.5. После установления оптимальных требований к первичной и вторичной упаковке и условиям хранения предприятие-изготовитель (разработчик) приступает к опытному хранению лекарственного средства в рекомендованной упаковке и в указанных условиях, с целью обнаружения скрытых факторов, могущих повлиять на устойчивость лекарственного средства при хранении. В этих целях от каждой из не менее чем 3-х серий специально приготовленного опытного лабораторного или опытно-промышленного образца отбирают и укупоривают часть в количестве, достаточном для исследования стабильности лекарственного средства при хранении в течение 2-3 лет.
2.6. Опытные лабораторные и опытно-промышленные образцы лекарственных средств, находящиеся на изучении стабильности, подлежат анализу через каждые 6 месяцев по всем показателям проекта нормативного документа, а в дальнейшем по утвержденному нормативному документу (ФС или ФСП).
2.7. Хранение опытных образцов лекарственного средства при изучении его стабильности должно проводиться в той упаковке и в тех условиях, которые обусловлены п. 2.4.
2.8. Результаты исследований стабильности лекарственных средств сводят в таблицу, которая должна включать следующие разделы:
название лекарственного средства;
нормативная документация, по которой проводится анализ лекарственного средства;
вид упаковки;
условия хранения;
номер серии лекарственного средства;
время закладки образца на хранение;
дата анализа;
результаты анализа по нормативной документации;
отклонения от требований нормативной документации;
выводы по хранению лекарственного средства.
2.9. На основании полученных результатов предприятие-изготовитель (разработчик), изучающее стабильность лекарственного средства, определяет первоначальный срок годности с указанием вида упаковки, требуемых условий хранения и транспортирования и вносит эти данные в проект нормативной документации.
2.10. После организации промышленного производства лекарственного средства предприятие-изготовитель проводит все работы по изучению стабильности на промышленных сериях.
3. Порядок изучения стабильности лекарственных средств
3.1. Предприятие-изготовитель при организации промышленного производства нового лекарственного средства должно продолжить исследования по изучению стабильности лекарственного средства и подтверждению или уточнению срока годности для внесения рекомендаций в нормативную документацию.
3.2. Контроль стабильности лекарственного средства в процессе хранения и условия его хранения должны соответствовать требованиям нормативной документации, по которой оно было произведено.
3.3. Первичная и вторичная упаковка изучаемых лекарственных средств должны соответствовать требованиям нормативной документации, по которой лекарственное средство было произведено.
3.4. При расфасовке лекарственных средств в крупногабаритную первичную упаковку (фляги, бутыли, железные бочки, жестяные барабаны, пакеты полимерные, мешки бумажные 3 и 4-слойные и т.д.) для изучения стабильности допускается использование аналогичной упаковки меньшей емкости, достаточной для моделирования.
3.5. Для изучения стабильности лекарственных средств должны быть взяты образцы не менее чем 3-х промышленных серий лекарственных средств.
От каждого образца лекарственного средства для периодических испытаний отбирают пробу для проведения необходимого количества анализов.
3.6. В случае существенного изменения технологии производства лекарственного средства (изменение видов и качества сырья, режимов сушки, очистки, кристаллизации и др., например, для антибиотиков - изменение штамма продуцента и питательной среды), производится сравнение этого лекарственного средства в соответствии с п. 2.3. и п. 2.6. с теми же показателями лекарственного средства, произведенного по неизмененной технологии.
3.7. Лекарственное средство, произведенное по измененной технологии, подлежит проверке на сохранность в соответствии с п. 2.6. и п. 3.6 только в случае расхождения его свойств по п. 2.3. со свойствами образца, выпущенного по старой технологии.
3.8. Перед закладкой на хранение все лекарственные средства подвергают полной проверке по всем показателям в объеме требований действующей нормативной документации с записью в таблице результатов исследований стабильности.
Примечания
1. При последующих проверках показатели, которые не могут измениться во время хранения, не определяют (например, содержание примесей сульфатов, хлоридов и т.д.).
2. По всем показателям действующей нормативной документации производят проверку также в случаях:
- обнаружения порчи лекарственного средства в процессе его хранения;
- при подготовке материалов для продления срока годности.
3.9. Образцы лекарственных средств, находящиеся на изучении, подлежат проверке в следующие сроки:
- при сроке годности по нормативной документации до одного года - через каждые 3 месяца;
- при сроке годности до 3-х лет - через каждые 6 месяцев;
- при сроке годности свыше 3-х лет - через 12 месяцев.
4. Условия хранения образцов при изучении стабильности
4.1. Образцы лекарственных средств, отобранные для изучения стабильности, должны храниться посерийно в специальном помещении в упаковке и условиях, соответствующих требованиям действующей нормативной документации.
Образцы лекарственных средств списка А должны храниться в специальных условиях, определенных компетентными органами.
4.2. Показатели температуры и влажности помещений и, при необходимости, другие параметры должны заноситься в журнал климатического контроля.
5. Порядок оформления и представления отчетных
материалов о работе по установлению сроков годности
Предприятие-изготовитель (разработчик) включает предложения по установлению сроков годности лекарственного средства в нормативную документацию.
Пояснительная записка должна содержать выводы и предложения, обоснованные аналитическими данными, сведенными в таблицу результатов испытания на стабильность лекарственных средств и подтверждающими первоначальный или новый (уточненный) срок годности, а также включающие рекомендации по уточнению или изменению первичной и вторичной упаковки, условий хранения и транспортирования.
В случае неоднократного подтверждения заявленного срока годности лекарственного средства, выпускаемого по неизмененной технологии, допускается оформление результатов изучения стабильности с представлением табличных аналитических данных на момент выпуска и истечения срока годности (с запасом не менее трех месяцев).
ФАРМАКОПЕЙНЫЕ СТАТЬИ
АЗИТРОМИЦИН (ФС 42-0213-07)
(2R,3S,4R,5R,8R,10R,11R,12S,13S,14R)-3,4,10-Тригидрокси-13-[(2,6-дидезокси-3-C-метил-3-O-метил-альфа-L-рибо-гексопиранозил)окси]-3,5,6,8,10,12,14-гептаметил-11-[[3,4,6-тридезокси-3-(диметиламино)-бета-D-ксило-гексопиранозил]окси]-2-этил-1-окса-6-аза-циклопентадекан-15-он, дигидрат
C38H72N2O12 x 2H2O М.м. 785,0
Содержит не менее 94,0% и не более 102,0% C38H72N2O12 в пересчете на безводное вещество.
1 мг C38H72N2O12 (азитромицина) соответствует специфической активности, равной одной единице действия (ЕД).
Описание. Белый или почти белый порошок.
Растворимость. Легко растворим в хлороформе и спирте 96%, практически нерастворим в воде.
Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия
-1
бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения
должен соответствовать спектру стандартного образца азитромицина.
Если в спектрах обнаруживаются различия, регистрируют спектры растворов субстанции и стандартного образца азитромицина с концентрацией 90 г/л в хлористом метилене.
Время удерживания основного пика на хроматограмме испытуемого раствора (раздел "Количественное определение") должно соответствовать времени удерживания основного пика на хроматограмме раствора стандартного образца азитромицина.
Удельное вращение. От -45 до -49 град. в пересчете на безводное вещество (2% раствор субстанции в этаноле).
Прозрачность раствора. Раствор 0,5 г субстанции в 50 мл этанола должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном I.
Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании на Прозрачность раствора, должен быть бесцветным или выдерживать сравнение с эталоном B9.
pH. От 9,0 до 11,0 (0,1 г субстанции растворяют в 25 мл метанола и разбавляют водой до 50 мл).
Посторонние примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях, описанных в разделе "Количественное определение".
Хроматографируют испытуемый раствор А, раствор сравнения А и раствор сравнения Б. Время регистрации хроматограммы испытуемого раствора А должно не менее чем в 3 раза превышать время удерживания пика азитромицина.
На хроматограмме испытуемого раствора А площадь пика примеси В должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 2,0%); площадь пика любой другой примеси должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 1,0%); суммарная площадь пиков примесей должна быть не более пятикратной площади пика на хроматограмме раствора сравнения А (не более 5,0%).
Хлориды. 0,75 г субстанции встряхивают с 25 мл воды в течение 1 мин. и фильтруют. 10 мл фильтрата должны выдерживать испытание на хлориды (не более 0,01% в субстанции).
Вода. Не менее 1,9% и не более 6,5%. Определение проводят методом К.Фишера из точной навески около 0,5 г субстанции.
Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ.
Буферный раствор с pH 6,5. 34,84 г калия фосфата двузамещенного растворяют в 900 мл воды, доводят pH раствора до 6,5 85% фосфорной кислотой, разбавляют водой до 1000 мл и перемешивают.
Испытуемый раствор А. Около 0,1 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, растворяют в смеси ацетонитрил - вода (2:3), доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают.
Испытуемый раствор Б. 5 мл испытуемого раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, доводят объем раствора смесью ацетонитрил - вода (2:3) до метки и перемешивают.
Стандартный раствор А. Около 0,05 г (точная навеска) стандартного образца азитромицина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в смеси ацетонитрил - вода (2:3), доводят объем раствора той же смесью до метки и перемешивают.
Раствор сравнения А. 1 мл стандартного раствора А разбавляют смесью ацетонитрил - вода (2:3) до 25 мл.
Раствор сравнения Б. 0,002 г стандартного образца примеси В азитромицина (3-дезоксиазитромицин; стандарт ВР или аналогичного качества) растворяют в 25 мл смеси ацетонитрил - вода (2:3).
Раствор для проверки пригодности системы. 0,002 г азитромицина и 0,002 г стандартного образца примеси А азитромицина (6-дезметилазитромицин; стандарт ВР или аналогичного качества) растворяют в 20 мл раствора сравнения Б.
Хроматографические условия
Колонка - 250 x 4,6 мм с октадецилсилил силикагелем (C18),
5 мкм;
Температура - 70 град. C;
Подвижная - буферный раствор с pH 6,5 - ацетонитрил - вода
фаза(ПФ) (2:7:11);
Скорость потока - 1 мл/мин.;
Детектор - спектрофотометрический, 215 нм;
Объем пробы - 100 мкл;
Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы. Время удерживания пика азитромицина около - 26 мин. Относительное время удерживания пика примеси А - около 0,42, пика примеси В - около 1,7. Разрешение (R) между пиками азитромицина и примеси А должно быть не менее 7,0.
Пять раз хроматографируют стандартный раствор А. Относительное стандартное отклонение для площади пика азитромицина должно быть не более 2,0%.
Хроматографируют испытуемый раствор Б и стандартный раствор А и определяют площади пиков азитромицина.
Содержание C38H72N2O12 в процентах (X) вычисляют по формуле:
S1 x a 0 x P x 100
X = -------------------,
S0 x a1 x (100 - W)
где:
S1 - площадь пика азитромицина на хроматограмме испытуемого раствора Б;
S0 - площадь пика азитромицина на хроматограмме стандартного раствора А;
a1 - навеска субстанции в граммах;
a0 - навеска стандартного образца азитромицина в граммах;
W - содержание воды, в процентах;
P - содержание основного вещества в стандартном образце азитромицина в процентах.
Хранение. Список Б. В сухом месте.
АМЛОДИПИНА БЕСИЛАТ (ФС 42-0214-07)
5-Метилового 3-этилового эфира (RS)-2-[(2-аминоэтокси)метил]-6-метил-4-(2-хлорфенил)-1,4-дигидропиридин-3,5-дикарбоновой кислоты бензолсульфонат
C20H25ClN2O5 x C6H6O3S М.м. 567,1
Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% C20H25CIN2O5 x C6H6O3S в пересчете на безводное вещество.
Описание. Белый или почти белый порошок.
Растворимость. Легко растворим в метаноле, умеренно растворим в спирте 96%, мало растворим в воде.
Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия
-1
бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения
должен соответствовать рисунку спектра амлодипина бесилата (Приложение 1 -
не приводится).
Ультрафиолетовый спектр 0,005% раствора субстанции в смеси метанол - 0,1 М раствор хлористоводородной кислоты (99:1) в области от 300 до 400 нм должен иметь максимум поглощения при 360 нм.
Посторонние примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ.
Буферный раствор с pH 3,0. 7 мл триэтиламина растворяют в 1000 мл воды и доводят pH раствора ортофосфорной кислотой до 3,0 +/- 0,1.
Испытуемый раствор. 0,01 г субстанции растворяют в 10 мл подвижной фазы (ПФ).
Раствор сравнения. 3 мл испытуемого раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают. 1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают.
Раствор для проверки пригодности системы. 0,005 г субстанции растворяют в 5 мл водорода пероксида и выдерживают при температуре 70 град. C в течение 45 мин.
Хроматографические условия
Колонка - 15 x 0,39 см с октадецилсилил силикагелем (C18),
5 мкм;
ПФ - ацетонитрил - метанол - буферный раствор
с pH 3,0 (15:35:50);
Скорость потока - 1,0 мл/мин.;
Детектор - спектрофотометрический, 237 нм;
Объем пробы - 10 мкл.
Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы. Относительные времена удерживания компонентов: примесь D амлодипина (3-этил 5-метил 2-[(2-аминоэтокси)метил]-4-(2-хлорфенил)-6-метоксипиридин-3,5-дикарбоксилат) - около 0,5; амлодипин - 1,0 (около 7 мин.). Разрешение (R) между пиками должно быть не менее 4,5.
Хроматографируют раствор сравнения и испытуемый раствор. Время регистрации хроматограммы испытуемого раствора должно не менее чем в 3 раза превышать время удерживания основного пика.
Удвоенная площадь пика примеси D на хроматограмме испытуемого раствора должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3%); сумма площадей всех других пиков посторонних примесей должна быть не более площади пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,3%). Не учитывают пик бензилсульфоната (относительное время удерживания около - 0,2) и пики, площадь которых составляет менее 0,1 площади пика на хроматограмме раствора сравнения (0,03%).
Вода. Не более 0,5%. Около 3,0 г субстанции (точная навеска) титруют реактивом К.Фишера.
Сульфатная зола и тяжелые металлы. Сульфатная зола из 1 г субстанции (точная навеска) не должна превышать 0,2% и должна выдерживать испытание на тяжелые металлы (не более 0,001% в субстанции).
Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями общей статьи "Остаточные органические растворители".
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".
Количественное определение. Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях, описанных в разделе "Посторонние примеси".
Испытуемый раствор. Около 0,05 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ПФ, доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают. 5 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают.
Стандартный раствор. Около 0,05 г (точная навеска) стандартного образца амлодипина бесилата помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в ПФ, доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают. 5 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора ПФ до метки и перемешивают.
Пять раз хроматографируют стандартный раствор. Относительное стандартное отклонение площади пика амлодипина должно быть не более 2%.
Хроматографируют испытуемый и стандартный растворы.
Содержание C20H25ClN2O5 x C6H6O3S в субстанции в процентах (X) в пересчете на безводное, свободное от остаточных органических растворителей вещество, вычисляют по формуле:
S x a x P x 100
1 0
x = -------------------,
S x a x (100 - W)
0 1
где:
S - площадь пика амлодипина на хроматограмме испытуемого раствора;
S - площадь пика амлодипина на хроматограмме стандартного раствора;
a - навеска субстанции, в граммах;
a - навеска стандартного образца амлодипина бесилата, в граммах;
W - суммарное содержание воды и остаточных органических растворителей в
субстанции, в процентах;
P - содержание основного вещества в стандартном образце амлодипина
бесилата, в процентах.
Хранение. Список Б. В сухом, защищенном от света месте.
АНАЛЬГИН (ФС 42-0215-07)
[(1,5-Диметил-3-оксо-2-фенил-2,3-дигидро-1H-пиразол-4-ил)(метил)амино]-метансульфонат натрия, моногидрат
C13H16N3NaO4S x H2O М.м. 351,36
Содержит не менее 99,0% C13H16N3NaO4S в пересчете на сухое вещество.
Описание. Белый или белый с едва заметным желтоватым оттенком кристаллический порошок без запаха.
Растворимость. Очень легко растворим в воде, умеренно растворим в спирте 96%, практически нерастворим в хлороформе.
Подлинность. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия
-1
бромидом, в области от 4000 до 400 см по положению полос поглощения
должен соответствовать рисунку спектра анальгина (Приложение 1).
Ультрафиолетовый спектр поглощения 0,002% раствора субстанции в 0,1 М растворе хлористоводородной кислоты в области от 245 до 280 нм должен иметь максимум при 258 нм.
0,05 г субстанции растворяют в 1 мл водорода пероксида. Раствор окрашивается в слегка голубой цвет, который быстро исчезает, и через несколько минут раствор становится красным.
0,1 г субстанции смачивают 0,1 мл воды, прибавляют 5 мл спирта 96% и 0,5 мл хлористоводородной кислоты разведенной 8,3%. После растворения субстанции прибавляют 5 мл 0,1 М раствора калия йодата; раствор окрашивается в малиновый цвет; при дальнейшем прибавлении реактива окраска усиливается и выделяется бурый осадок.
Субстанция дает характерную реакцию Б на натрий.
Прозрачность раствора. Раствор 0,5 г субстанции в 5 мл свежепрокипяченной и охлажденной воды должен быть прозрачным или выдерживать сравнение с эталоном I.
Цветность раствора. 6,25 г субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора свежепрокипяченной и охлажденной водой до метки и перемешивают (испытуемый раствор). Не более чем через 10 мин. проводят испытание одним из методов.
А. Окраска испытуемого раствора не должна быть интенсивнее окраски эталона GY6.
Б. Оптическая плотность испытуемого раствора, измеренная в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 400 нм относительно воды, должна быть не более 0,1.
pH. От 6,0 до 7,5 (10% раствор).
Посторонние примеси. Определение проводят одним из методов.
Метод ТСХ
Испытуемый раствор. 1 г субстанции помещают в колбу с притертой пробкой вместимостью 50 мл, прибавляют 25 мл безводного хлороформа, встряхивают в течение 5 мин. и фильтруют через бумажный фильтр, смоченный безводным хлороформом, отбрасывая первые порции фильтрата.
Раствор сравнения А. 0,01 г 4-аминоантипирина растворяют в 50 мл безводного хлороформа.
Раствор сравнения Б. 10 мл раствора сравнения А разбавляют безводным хлороформом до 25 мл.
Раствор 4-метиламиноантипирина. 0,035 г субстанции растворяют в 5 мл предварительно охлажденного до 10 град. C 0,01 М раствора хлористоводородной кислоты и прибавляют по каплям при перемешивании 0,1 М раствор йода до появления желтой окраски, не исчезающей в течение 1 мин., следя за тем, чтобы температура раствора не превышала 10 град. C. К полученному раствору прибавляют по каплям 0,1 М раствор натрия гидроксида до pH 8 и дважды экстрагируют 4-метиламиноантипирин хлороформом порциями по 5 мл. Объединенные хлороформные извлечения сушат в течение 30 мин. над 0,5 г натрия сульфата безводного. 1 мл полученного раствора разбавляют безводным хлороформом до 25 мл.
На линию старта пластинки со слоем силикагеля 60 F254 наносят 10 мкл (эквивалент 400 мкг анальгина) испытуемого раствора, 10 мкл (2 мкг) раствора сравнения А, 10 мкл (0,8 мкг) раствора сравнения Б и в одну точку 5 мкл (0,4 мкг) раствора сравнения Б и 5 мкл (около 0,4 мкг) раствора 4-метиламиноантипирина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 5 мин., помещают в камеру со смесью хлороформ - метанол (4:1) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт подвижной фазы пройдет 3/4 длины пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 5 мин. и просматривают в УФ-свете при 254 нм.
Пятно посторонней примеси на хроматограмме испытуемого раствора, находящееся на одном уровне с пятном 4-метиламиноантипирина на хроматограмме из общей точки нанесения, по совокупности величины и интенсивности поглощения не должно превышать пятно на хроматограмме раствора сравнения А (не более 0,5%); пятно любой другой посторонней примеси не должно превышать пятно на хроматограмме раствора сравнения Б (не более 0,2%). Суммарное содержание примесей не должно превышать 0,5%. Пятно вблизи линии старта (анальгин) в расчет не принимают.
Результаты испытания считаются достоверными, если на хроматограмме из общей точки нанесения четко видны два полностью разделенных пятна.
Метод ВЭЖХ
Буферный раствор с pH 7,0. 6,0 г натрия фосфата однозамещенного растворяют в 1000 мл воды, прибавляют 1 мл триэтиламина и доводят pH раствора 10% раствором натрия гидроксида до значения 7,0.
Испытуемый раствор. 0,050 г субстанции растворяют в 10 мл метанола. Раствор анализируют тотчас же.
0,05% раствор 4-аминоантипирина. 0,010 г 4-аминоантипирина растворяют в 20 мл метанола.
Раствор сравнения. 1 мл 0,05% раствора 4-аминоантипирина разводят метанолом до 20 мл.
Раствор для проверки пригодности системы. 0,02 г субстанции растворяют в 10 мл метанола и кипятят с обратным холодильником в течение 10 мин., охлаждают и разводят метанолом до 20 мл. К 5 мл полученного раствора прибавляют 5 мл 0,05% раствора 4-аминоантипирина и перемешивают.
Условия хроматографирования
Колонка - 25 x 0,46 см с октадецилсилил силикагелем (C18),
5 мкм;
Подвижная фаза
(ПФ) - буферный раствор с pH 7,0 - метанол (72:28);
Скорость потока - 1,0 мл/мин.;
Детектор - спектрофотометрический, 254 нм;
Объем пробы - 10 мкл.
Хроматографируют раствор для проверки пригодности системы. На хроматограмме должно наблюдаться 3 пика с относительными временами удерживания 1,0 (анальгин), около 1,4 (4-аминоантипирин) и около 2,0 (4-метиламиноантипирин). Разрешение (R) между пиками анальгина и 4-аминоантипирина должно быть не менее 2,2; между пиками 4-аминоантипирина и 4-метиламиноантипирина - не менее 3,0.
Дата добавления: 2015-09-29; просмотров: 26 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая лекция | | | следующая лекция ==> |