Занятие 9. Дата __. Тема: «Патогенные кокки: стафилококки, стрептококки, нейссерии»

Занятие 9. Дата ______. Тема: «Патогенные кокки: стафилококки, стрептококки, нейссерии»

Streptococcus pneumoniae Streptococcus pyogenes S.aureus в гное Neisseria gonorrhoeae в гное

(в органах) (чистая культура) (незавершенный фагоцитоз)

Окраска водным фуксином Окраска по Граму Окраска по Граму Окраска метиленовым синим

ФАКТОРЫ ВИРУЛЕНТНОСТИ СТАФИЛОКОККОВ

Neisseria meningitidis (ч.к.) Плазмокоагулаза Рост на 5% кровяном агаре Рост на ЖСА

(β-гемолиз) (лецитовителлаза)

Окраска по Граму

Таблица 20. Сравнительная характеристика стрептококков

Вид	Морфология, тинкториальные свойства	Среда для культивирования	Культуральные свойства	Факторы патогенности	Видовая дифференциация	Внутривидовая дифференциация
S. pneumoniae	Грам+ ланцеторидные диплококки, имеют капсулу	5% кровяной агар, 37^оС, СО2-инкуботор	Мелкие колонии с зоной зеленящего гемолиза	· Капсула · IgA-протеаза · Гиалуронидаза	Чувствителен к желчи и оптохину	По капсульному антигену на серовары (>80)
S. pyogenes	Грам+ кокки, расположенные цепочкой	5% кровяной агар, 37^оС, СО2-инкуботор	Мелкие колонии с зоной полного гемолиза	· М-протеин · Гиалуронидаза · Стрептокиназа · Стрептолизин	Чувствителен к бацитрацину	По типовому белковому М-антигену на серовары (по Ланцфельд)

Таблица 21. Этиологически значимые виды стрептококков

Вид	Серогруппа	Тип гемолиза	Дифференцирующий признак	Биотоп	Примеры заболеваний
S. pyogenes	A	β- гемолиз	Чувствителен к бацитрацину	Кожа, ротоглотка	Фарингит, ангина, пневмония, сепсис, скарлатина, рожа, ревматизм, гломерулонефрит, септический эндокардит
S. agalactiae	B	β- гемолиз	Устойчив к бацитрацину	Женские половые органы	Неонатальный менингит, сепсис
Enterococcus faecalis	D	α – или β - гемолиз	Устойчив к 6,5% NaCl; образование колоний черного цвета на желчном агаре с эскулином	Кишечник, уретра, женские половые органы	Инфекции мочевыводящих, желчевыводящих путей, эндокардит
S. pneumoniae	Не определена	α - гемолиз	Чувствителен к желчи и оптохину	Верхние дыхательные пути, ротоглотка	Пневмония, отит, синусит, сепсис
S. viridians S. mitis S. mutans	Не определена	α - гемолиз	Устойчивы к желчи и оптохину	Ротоглотка	Инфекционный эндокардит, кариес

Таблица 22. Протокол исследования гноя

Материал для исследования – отделяемое по дренажу

Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя

Предварительный клинический диагноз – послеоперационное нагноение

День исследования	Ход исследования	Результат исследования
	1. Приготовление мазка из исследуемого материала и окраска по Граму (бактериоскопическое исследование) 2. Посев исследуемого материала на желточно-солевой и 5% кровяной агар
	1. Микроскопия колоний (окраска фуксином) 2. Пересев на скошенный МПА для накопления чистой культуры
	1. Приготовление мазка и окраска по Граму (для определения степени чистоты выделенной культуры) 2. Посев на цитратную кроличью плазму и среду Гисса с маннитом (под вазелиновым маслом для создания анаэробных условий) 3. Фаготипирование культуры типовыми стафилококковыми бактериофагами: __________________________ 4. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам	Ø Доксициклин - ____мм Ø ___________________- ____ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм
Заключение и выводы: Из гноя больного выделены бактерии вида ____________________ фаготип ____, чувствительные к ___________________________________________________, устойчивые к _______________________________________________________.

Занятие 10. Дата ______. Тема: «Патогенные анаэробы: клостридии и неспорообразующие анаэробы»

Clostridium perfringens Clostridium perfringens Clostridium tetani Clostridium botulinum

(в органах) (чистая культура) (чистая культура) (чистая культура)

Окраска фуксином Окраска по Граму Окраска по Граму Окраска по Граму

Peptostreptococcus anaerobius Tесты для ускоренной диагностики инфекций,

(чистая культура) вызванных Clostridium perfringens

Окраска фуксином рост на среде Вильсона-Блера створаживание молока

Таблица 23. Определение типа ботулинического токсина с помощью РПГА (РОНГА)

Ингредиенты	1:10	1:20	1:40	1:80	1:160	1:320	1:640	Конт-роль
Изотонический раствор натрия хлорида, мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Исследуемый материал (промывные воды желудка, разведение 1:5), мл	0,5						вылить 0,5	---
Антительный эритроцитарный диагностикум соответствующего серотипа, мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
РЕЗУЛЬТАТЫ:
Ø с поливалентным диагностикумом АВЕ
Ø с диагностикумом А
Ø с диагностикумом В
Ø с диагностикумом Е
ВЫВОД:

РАЗДЕЛ: «КЛИНИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ»

Занятие 11. Дата _____. Тема: «Основы клинической микробиологии»

Таблица 24. Протокол бактериологического исследования мокроты

Материал для исследования – мокрота

Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя

Предварительный клинический диагноз – пневмония (?)

День исследования	Ход исследования	Результат исследования
	1. Приготовление серийных стократных разведений мокроты в стерильном физ. растворе: 9,9 мл 9,9 мл 9,9 мл 2. Посев газоном по 0,1 мл мокроты из разведения 10^-5на ЖСА и 5% кровяной агар, из разведения 10^-7на 5% кровяной агар
	1. Микроскопия колоний (окраска по Граму). 1. Пересев на скошенный МПА
	1. Определение чувствительности бактерий к антибиотикам	Ø __________________ - ___ мм Ø __________________ - ___ мм Ø __________________ - ___ мм Ø __________________ - ___ мм Ø __________________ - ___ мм
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: Из мокроты больного выделены бактерии вида ______________ в количестве _________ КОЕ/мл, что подтверждает/не подтверждает этиологическую роль выделенных бактерий в развитии заболевания. Выделенные бактерии чувствительны к ____________________________________, устойчивы к ___________________________________________________________.

Таблица 25. Протокол бактериологического исследования мочи

Материал для исследования – моча

Цель исследования – выделение и идентификация возбудителя

Предварительный клинический диагноз – острый пиелонефрит (?)

День исследования	Ход исследования	Результат исследования
	Посев мочи по Голду
	1. Микроскопия колоний (окраска по Граму). 2. Пересев на скошенный МПА
	Определение чувствительности бактерий к антибиотикам	Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм Ø ___________________ - ___ мм
ЗАКЛЮЧЕНИЕ: Из мочи больного выделены _______________________________ бактерии. Степень бактериурии - ________ КОЕ/мл, что подтверждает/не подтверждает этиологическую роль выделенных бактерий в развитии заболевания. Выделенные бактерии чувствительны к __________________________________, устойчивы к __________________________________.

Таблица 26. Определение степени бактериурии

Количество колоний в секторах на МПА	Среднее кол-во бактерий, КОЕ/мл мочи
Сектор А	Сектор 1	Сектор 2	Сектор 3
1-6	--	--	--	<1,000
8-20	--	--	--	3,000
20-30	--	--	--	5,000
30-60	--	--	--	10,000
70-80	--	--	--	50,000
100-150	6-10	--	--	100,000
>200	20-30	--	--	500,000
>200	40-60	--	--	1,000 000 (10^6)
>200	100-140	10-20	--	5,000 000 (5x10^6)
>200	>200	30-40	--	10,000 000 (10^7)
>200	>200	60-80	1-8	более 100,000 000 (10^8)

Занятие 12. Дата ______. Тема: «Бактерии - возбудители зоонозных инфекций (чумы, сибирской язвы, бруцеллеза, туляремии)»

Таблица 27. Реакция агглютинации для серологической диагностики туляремии

Ингредиенты						Контроль антигена	Контроль сыворотки
Изотонический раствор хлорида натрия, мл	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	1,0	─
Сыворотка больного 1: 25, мл	1,0	→	→	→	→ вылить	─	1,0
Диагностикум (в каплях)							─
Разведения сыворотки	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	─	1:25
Результат:
ВЫВОДЫ: Реакция агглютинации _______________________(положительная/отрицательная). Титр антител к Francicella tularensis _________, что подтверждает/не подтверждает диагноз туляремии.

Таблица 28. Реакция агглютинации для серологической диагностики бруцеллеза (реакция Хеддельсона)

0,08 мл сыворотки 0,03 мл антигена Разведение 1:50	0,04 мл сыворотки 0,03 мл антигена Разведение 1:100	0,02 мл сыворотки 0,03 мл антигена Разведение 1:200
Результат:	Результат:	Результат:
0,01 мл сыворотки 0,03 мл антигена Разведение 1:400	0,02 мл сыворотки 0,03 мл физ. р-ра Контроль сыворотки	0,03 мл антигена 0,03 мл физ. р-ра Контроль антигена
Результат:	Результат:	Результат:
ВЫВОД: Реакция Хеддельсона ___________________(положительная/отрицательная) до титра_______, что является/не является показанием для постановки реакции Райта.

Таблица 29. Реакция агглютинации для серологической диагностики бруцеллеза (реакция Райта)

Ингредиенты						Контроль антигена	Контроль сыворотки
Изотонический раствор хлорида натрия, мл	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5
Сыворотка больного 1: 25, мл	0,5	→	→	→	→ вылить	─	0,5
Диагностикум (в каплях)	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	0,5	─
Разведения сыворотки	1:50	1:100	1:200	1:400	1:800	─	1:50
Результат:
ВЫВОДЫ: Реакция агглютинации _____________________(положительная/отрицательная). Титр антител к бруцеллам _____, что подтверждает/не подтверждает диагноз бруцеллеза.

Таблица 30. Реакция термопреципитации по Асколи

Ингредиенты	Опыт	Контроли
Сибиреязвенная преципитирующая сыворотка, мл	0,2	0,2	--
Исследуемый антиген, мл	0,2	--	--
Стандартный сибиреязвенный антиген, мл	--	0,2	0,2
Неиммунная (нормальная) сыворотка, мл	--	--	0,2
Результат:
ВЫВОД: Реакция Асколи _____________________(положительная/отрицательная). В исследуемом материале обнаружен/не обнаружен сибиреязвенный антиген.

Таблица 31. Дифференциация видов бруцелл

Вид бруцелл	Условия выращивания в первых генерациях	Бактериостатическое действие красок	Выделение H2S
фуксин 1:50000	тионин 1:25000
Brucella melitensis	аэробные	+ (рост)	─ (нет роста)	─
Brucella suis	аэробные	─ (отсутствие роста)	+ (рост)	+
Brucella abortus	при 5 – 10 % CO2	+ (рост)	─ (отсутствие роста)	+ или ─

___Yersinia pestis______Brucella abortus___

(чистая культура) __ (чистая культура)__

Окраска генциановым фиолетовым Окраска по Граму

__Francisella tularensis_ __Bacillus anthracis __

___ (чистая культура) ___ __ (чистая культура)

Окраска по Граму Окраска по Граму

---

Дата добавления: 2015-09-29