Читайте также:
|
§ I. Питательные среды должны обязательно отвечать следующим требованиям: а) они должны содержать все необходимые питательные вещества, витамины и соли; б) иметь оптимальную рН; в) иметь достаточную влажность (особенно плотные среды). Кроме того, они должны быть стерильными и прозрачными.
§§ 4-7. Обратить внимание на внешний вид культуры: муть, пленка, осадок (для жидких культур). Описать внешний вид колоний на пластинках МПА: размеры; края колонии (ровные, фестончатые, лопастные); поверхность колонии (влажная или сухая, гладкая или шероховатая, складчатая или ровная, плоская или выпуклая и т.д.); прозрачность колонии (прозрачная, полупрозрачная, непрозрачная); наличие пигмента и цвет его; консистенция колонии (плотная, рыхлая, слизистая).
Из описанной колонии приготовить препарат-мазок, окрасить фуксином Пфейффера, зарисовать препарат и записать морфологию бактерий, а затем при помощи бактериальной петли сделать посев на косячок МПА. Для этого необходимо простерилизовать петлю, приподнять крышку чашки Петри и стерильной петлей прикоснуться к колонии. После этого в левую руку берется пробирка с косячком МПА (между большим и указательным пальцами) так, чтобы поверхность скошенного агара была перед глазами. Пробирка открывается над пламенем горелки, обжигается ее край, а затем петля вводится в пробирку до дна ее, где имеется небольшое количество конденсационной влаги. Плоской поверхностью петли прикасаются к поверхности косячка агара и делают посев штрихообразными движениями, постепенно продвигаясь снизу вверх. Обжигают на пламени спиртовки край пробирки и пробку и закрывают пробирку над пламенем спиртовки. На пробирке восковым карандашом -надписывают название культуры, дату посева, фамилию и группу студента и ставят посев до следующего занятия в термостат. Результаты работы оформляют в виде протокола по следующей форме.
Протокол исследования колонии.
1.Размер колонии_______________________________________
2.Форма колонии_______________________________________
3. Поверхность колонии_________________________________
4. Края колонии________________________________________
5.Прозрачность колоний_________________________________
6.Пигмент____________________________________________
7.Консистенция________________________________________
8.Форма бактерий______________________________________
9. Взаиморасположение бактерий_________________________
10.Латинское морфологическое название бактерий __________
§ 8. Приготовить из смеси бактерий препарат-мазок, окрасить его по Граму, промикроскопировать и определить, какие виды микробов находятся в смеси. Произвести посев смеси на пластинку МПА в чашке Петри для выделения изолированных колоний.
Для этого чашка Петри делится восковым карандашом на две половины. Каждый студент использует для посева одну половину чашки. Перед посевом следует тщательно проверить качество бактериальной петли, которая должна быть полностью замкнута. Прокаленной и остуженной петлей захватывают каплю бактериальной взвеси и переносят ее на МПА в один из углов отведенного для посева сектора (несколько отступая от границы сектора и от края чашки). Затем скользящими движениями наносят петлей штрихи по поверхности МПА возможно ближе штрих к штриху, но не наслаивая один штрих на другой так, чтобы использовать всю поверхность чашки, за исключением полоски в 3-4 мм шириной у края чашки и у границы сектора (во избежание слияния посева с соседним). В момент посева необходимо строго соблюдать правила, предупреждающие загрязнение питательной среды микробами воздуха (посев производить под прикрытием крышки или держа чашку в вертикальном положении, не оставлять чашку открытой). Чашки с посевами помещают в термостат до следующего занятия.
§ 9. Сделать посев отпечатков пальцев руки на пластинки МПА и среды Эндо.
При помощи стерильного ватного тампона взять материал со слизистой оболочки носоглотки и произвести посев на простой и кровяной МПА.
§ 10. Объяснить принципы конструирования сред "пестрого ряда"; а также характерные изменения последних, наступающие в результате ферментативной деятельности бактерии. Произвести посев на среды "пестрого ряда" культур кишечной палочки и фекального шелочеобразователя.
Помимо общепринятых сред, в состав "пестрого ряда" нередко включаются среды с другими углеводами, а также среда для определения уреазы - фермента, расщепляющего мочевину. Среда представляет собой мясо-пептонный бульон с добавлением 1-2% мочевины и индикатора фенолового красного. При разложении мочевины образуется аммиак, вызывающий изменение рН среды и соответственно желтой окраски индикатора, на красную.
Рис.1 Латинское морфологическое название бактерий (окраска фуксином)
Рис.2 Колонии пигментных бактерий
Рис.3 Смесь бактерий; окраска по Граму
Контрольные вопросы
Каким требованиям должны удовлетворять питательные среды для выращивания микробов?
Какие виды питательных сред применяются в бактериологической практике?
Что такое агар, и для какой цели он применяется?
Что такое универсальная питательная среда?
Какие сложные (специальные) среды Вы знаете?
Каково назначение элективных (избирательных) питательных сред?
Каково назначение дифференциально-диагностических сред?
По какому принципу сконструированы дифференциальные среды Эндо, Левина, Плоскирева?
Какова оптимальная температура для выращивания патогенных микробов?
Что такое термофилы, психрофилы, мезофилы?
По какому принципу устроены терморегуляторы?
Что такое стерилизация?
Что такое дезинфекция?
Чем отличается стерилизация от дезинфекции?
Какие методы используют для стерилизации?
Какие предметы лучше подвергать стерилизации сухим жаром?
Что такое дробная стерилизация?
Когда она применяется?
Что такое пастеризация и тиндализация и в каких случаях они применяются?
Как устроен автоклав?
Какой порядок работы с автоклавом?
Какие методы контроля качества стерилизации вам известны?
Какова методика бактериологического контроля эффективности стерилизации?
Что такое стерилизация фильтрованием?
Какие изменения происходят в жидких питательных средах при росте бактерий?
Какие признаки колоний имеют дифференциальное значение?
Какие формы колоний вы знаете?
Какой характер имеет консистенция колоний у капсульных бактерий?
Какая поверхность может быть у колоний бактерий?
Почему пигмент у одних видов бактерий окрашивает только колонии, а у других - колонии и питательную среду?
Какие правила необходимо соблюдать при пересеве культуры?
Как следует держать бактериологическую петлю при посеве бактерий на пластинки МПА в чашках Петри и при посеве на косячки?
Как следует держать пробирки с культурой бактерий и питательной средой при посеве бактерий?
Какие методы микробиологической диагностики инфекционных болезней вы знаете?
Какова последовательность исследования смеси бактерий?
Для чего необходимо получить рост изолированных колоний?
Какие методы посева используют для получения изолированных колоний?
Как предупредить загрязнение питательных сред бактериями из воздуха?
Как избежать повреждения плотной питательной среды при посеве бактериальной петлей?
Как производится взятие материала из зева?
Для каких целей производится исследование микрофлоры пальцев и зева?
Какая микрофлора преобладает на кожных покровах человека?
С какой целью получают чистые культуры?
Почему нельзя работать со смешанными культурами?
Какие различия между бактериоскопическим и бактериологическим анализами?
Какие края бывают у колоний бактерий?
Как определить прозрачность "колоний?
Почему для изучения микрофлоры рук используют среду Эндо?
Какие углеводы чаше всего включаются в среды "пестрого ряда"?
Какой цвет имеет углеводная среда с индикатором Андреде в случае ферментации углевода?
Какого цвета углеводная среда с индикатором ВР, если бактерии потребляют углевод? Почему?
Как определяется способность бактерий ферментировать углеводы с образованием газа?
Как определяется индол в среде?
Как определяется уреазная активность бактерий?
Как определить способность бактерий образовывать H2S?
Рис.4 Схема строения автоклава типа АВ-1. Обозначения: 1.Крышка. 2.Стерилизационная камера. 3.Водоуказательная колонка. 4.Мановакууметр. 5.Фильтр. 6.Выпуск конденсата. 7.Электронагреватель. 8.Водопаровая камера. 9.Электроконтактный манометр. 10.Предохранительный клапан. 11.Выпуск пара для создания отрицательного давления.
ЗАНЯТИЕ 6
Дата_____________
Тема: БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ
План занятия.
1.Регистрация результата пересева культуры бактерий. Макро- и микроскопия выросшей культуры.
2. Исследование смеси бактерий (продолжение). Макро- и микроскопия колоний, выросших на пластинках МПА. Посев колоний на косячки МПА для получения чистых культур.
3.Знакомство с микрофлорой человеческого тела. Регистрация результатов посева отпечатков пальцев и слизи из носоглотки.
4.Ферменты бактерий. Регистрация результатов посева на среды пестрого ряда.
5.Методы культивирования анаэробов. Демонстрация способов удаления кислорода из атмосферы роста и питательных сред для анаэробов. Посев почвы на среды Тароцци и Вильсон-Блэра (в трубки
Вейон-Виньяля). Способ Фортнера.
6.Дифференциально-диагностические питательные среды: Плоскирева, Эндо, Левина и др. Посев различных культур бактерий на среды Плоскирева, Эндо и МПА.
Дата добавления: 2015-12-07; просмотров: 199 | Нарушение авторских прав