|
Читайте также: |
ХІД РОБОТИ:
I. Обладнання робочого місця.
Принцип методів: Білок під дією кислот згортається, утворюючи каламутність різної інтенсивності або пластівці.
II. Визначення наявності білка в сечі 20% сульфосаліциловою кислотою.
1. Набрати досліджувану сечу у центрифугальну пробірку і процентрифугувати.
2. В дві серологічні пробірки (”Д” - досвід,”К”- контроль) помістити по 1-2 мл процентрифугованої сечі.
3. До сечі у пробірці”Д” додати 3-4краплі 20% сульфосаліцилової кислоти.
4. Результат у пробірках ”Д” і”К” спостерігати на темному фоні. Якщо у пробірці ”Д” є каламутність або білі пластівці, то в досліджуваній сечі присутній білок. Проба дуже чутлива, можна виявити мінімальну концентрацію білка в сечі - 0,015г\л.
5. Замалювати результати.
III. Визначення наявності білка в сечі пробою Геллера.
1. Досліджувану сечу проценрифугувати.
2. В серологічну пробірку налити 1 мл 50% нітратної кислоти або реактиву Ларіонової.
3. За допомогою пастерівської піпетки обережно нашарувати по стінці пробірки таку ж кількість процентрифугованої сечі.
4. Результат спостерігати на темному фоні протягом трьох хвилин. Якщо на межі двох рідин утворилось біле кільце, то в досліджуваній сечі присутній білок.
Чутливість проби Геллера 0,033 г/л, при такому вмісті білка з’являється ниткоподібне кільце між другою і третьою хвилинами.
5. Замалювати результат.
IV. Визначення наявності білка експрес-тестами (альбуфан).
Принцип: Білок змінює колір індикатора, що знаходиться в буферному розчині, від жовтого (через червоний) до синього.
1. З упаковки витягнути смужку індикаторного паперу і погрузити її в досліджувану сечу.
2. Через 2-3 секунди смужку помістити на білу скляну пластинку.
3. Через 60 секунд, використовуючи кольорову шкалу на упаковці, оцінити результат.
Градація кольорової шкали: О(негативна); 1 (сліди); 2 (слабкопозитивна); З (позитивна) відповідають концентрації білка 0,3; 1; 5.
4. Замалювати результат.
У клініко-діагностичній лабораторії використовують ще такі експрес-тести для визначення наявності білка в сечі: біофан, асфан та інші.
V. Кількісне визначення білка в сечі методом розведення за Брандбергом- Робертсом-Стольниковим.
Принцип: В основу метода покладено кільцеву пробу Геллера, яка дає позитивний результат при наявності в сечі не менше 0,033 г/л білка. При проведенні цієї реакції звертають увагу на ширину, щільність та час утворення кільця.
Поява ниткоподібного кільця між 2-3 хвилинами свідчить про вміст білка 0,033 г/л. Поява кільця раніше 2 хвилин свідчить про значну кількість білка в сечі.
1. В штатив помістити ряд серологічних пробірок, в які набрати по 1 мл 50% нітратної кислоти або реактиву Ларіонової.
2. В пастерівську піпетку набрати відцентрифуговану сечу і нашарувати її на реактив.
3. Включити секундомір і спостерігати за утворенням кільця на темному фоні.
4. При появі кільця секундомір виключити і звернути увагу на характер кільця: компактне, широке, ниткоподібне:
- якщо утворилось кільце ниткоподібне між другою і третьою хвилинами, то записати кількість білка 0,033г/л;
- якщо утворилось кільце ниткоподібне відразу ж після нашарування, то цільну сечу розвести у 2 рази (1 мл сечі + 1 мл очищеної води);
- якщо утворилось широке кільце - цільну сечу розвести у 4 рази (1 мл сечі + З мл води);
- якщо утворилось компактне кільце - цільну сечу розвести у 8 разів (1 мл сечі + 7 мл води);
- якщо утворилось ниткоподібне кільце не відразу, а до 1 хвилини - цільну сечу розвести у 11/2 рази (2 мл сечі + 1 мл води).
5. Розведення сечі з наступним нашаруванням проводити до тих пір, доки не з’явиться ниткоподібне кільце протягом 1-4 хвилин.
6. При появі ниткоподібного кільця протягом 1-4 хвилин використати таблицю поправок для розрахунку кількості білка:
| Час утворення кільця, хв. | Поправка |
| 1-11/4 | 13/8 |
| 11/4 - 11/2 | 11/4 |
| 11/2 – 13/4 | 13/16 |
| 13/4 – 2 | 11/8 |
| 2 - 21/2 | 11/16 |
| 21/2 – 3 | |
| 3 - 31/2 | 15/16 |
| 31/2 - 4 | 7/8 |
7. Розрахувати результат: 0,033г/л помножити на показник розведення і на
поправку.
8. Занести результати в бланк аналізу.
9. Вирішити ситуаційні задачі.
| Міністерство охорони здоров’я України Житомирська обласна лікарня ім. ім.О.Ф.Гербачевського | код форми за ЗКУД код закладу за ЗКПО МЕДИЧНА ДОКУМЕНТАЦІЯ форма: 210/0 Затверджена наказом МОЗ України 04.01.2001 р. № 1 |
| Аналіз сечі № ____ П.І.Б.хворого _______________________________ Відділення ____________ Діагноз ______________ Кількість ____________ Колір _________________ Прозорість _________ Питома вага _____________ Білок __________ Глюкоза ____________________ Уробілін __________ Жовчні пігменти __________ Реакція ______________ Ацетон _______________ Діастаза ____________________________________ Мікроскопія осаду Лейкоцити __________________________________ ___________________________________________ Еритроцити _________________________________ ___________________________________________ Епітелій ____________________________________ Циліндри гіалінові ___________________________ зернисті ___________________________ Елементи неорганізованого осаду ______________ солі ________________________________________ слиз _______________________________________ мікрофлора _________________________________ "___" _____ 20 __ р. Час_____ Підпис___________ |
Ситуаційна задача №1
При нашаруванні сечі на 50% розчин нітратної кислоти ниткоподібне кільце утворилось через 3,5 хвилини.
Поправка згідно таблиці для 3,5 хвилини 15/16.
Розрахувати кількість білка в 1 л сечі.
Відповідь_________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ситуаційна задача №2
При нашаруванні розведеної у 8 разів сечі ниткоподібне кільце утворилось через 1,5 хвилини.
Поправка згідно таблиці для 1,5 хвилини 1 1/4
Розрахувати кількість білка в 1л сечі.
Відповідь_________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ситуаційна задача №3
Розрахувати кількість білка за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим, якщо ниткоподібне кільце дала сеча розведена у 8 разів в межах 1 3/4хв- 2 хв
Поправка згідно таблиці 1 1/8
Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ситуаційна задача №4
Розрахувати кількість білка в сечі за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим, якщо ниткоподібне кільце дала розведена у 10 разів сеча через 2 хвилини 40 секунд.
Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ситуаційна задача №5
Розрахувати кількість білка в сечі за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим, якщо ниткоподібне кільце утворилось при нашаруванні сечі розведеної у 20 разів через З хвилини 15 секунд. Поправка згідно таблиці 15/16
Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ситуаційна задача №6
Розрахувати кількість білка за Брандбергом-Робертсом-Стольниковим, якщо ниткоподібне кільце дала сеча розведена у 64 рази в кінці третьої хвилини.
Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ситуаційна задача №7
При нашаруванні сечі, розведеної в 128 разів на 50% розчин нітратної кислоти за методом Брандберга-Робертса-Стольникова ниткоподібне кільце утворилось біля 3 хвилин.
Розрахувати кількість білка, який міститься в 1л сечі.
Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Ситуаційна задача №8
При нашаруванні сечі, розведеної в 4 рази на 50% розчин нітратної кислоти за методом Брандберга-Робертса-Стольникова ниткоподібне кільце утворилось через 2,5 хвилини.
Розрахувати кількість білка в 1л сечі.
Поправка для 2,5 хвилини 1 1/16.
Відповідь:________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Для нотаток
Підпис викладача:___________
Дом. завдання: “Кількісне визначення білка в сечі на ФЕКу”.
1. К.С.Плотнікова ” Практикум з клінічних лабораторних досліджень”с.107-112.
2. О.С.Манастирська “Клінічні лабораторні дослідження” с.61-62.
Навчальна практика №11
Дата:_________________
Тема: Кількісне визначення білка в сечі на ФЕКу.
Мета: Оволодіти методикою визначення кількості білка.
Література:
1. К.С.Плотнікова ” Практикум з клінічних лабораторних досліджень”с.107-112.
2. О.С.Манастирська “Клінічні лабораторні дослідження” с.61-62.
Знати: 1. Причини і види протеїнурій.
Уміти: 1. Готувати реактиви.
2. Працювати з ФЕКом і визначати кількість білка на ФЕКу.
3. Будувати калібрувальний графік.
4. Оцінювати результат.
ПЛАН:
1. Визначення наявності білка в сечі.
2. Визначення кількості білка в сечі на ФЕКу.
3. Оцінювання результатів.
Забезпечення заняття:
1. Посуд: пробірки хімічні, центрифугальні, піпетки мірні на 1мл, на 2мл, на 5мл, на 10мл, на 0,1 мл, на 0,2мл.
2. Реактиви: 3 % розчин сульфосаліцилової кислоти, 0,9% розчин хлориду натрію, 1% розчин альбуміну(стандарт), насичений розчин хлориду натрію, 20% сульфосаліцилова кислота, 50% нітратна кислота, реактив Ларіонової, дез.розчин.
3. Обладнання: ФЕК, штатив для пробірок, електроцентрифуга.
4. Досліджуваний матеріал: сеча з вмістом білку.
5. Темний папір.
Проведення поточного контролю теоретичних знань студента:
1. Чи є білок в сечі здорової людини?
2. Як називають появу білка в сечі?
3. Дати класифікацію протеїнурій.
4. Які причини виникнення ниркової фізіологічної протеїнурії?
5. Які причини виникнення ниркової органічної протеїнурії?
6. Які причини виникнення позаниркової протеїнурії?
7. Які методи визначення наявності білка в сечі?
8. На якій властивості білка базуються методи його визначення?
9. Як визначити наявність білка в сечі з 20% сульфосаліциловою кислотою?
10. Як визначити наявність білка в сечі пробою Геллера?
11. У якому випадку визначають кількість білка?
12. Який принцип методу Брандберга-Робертса-Стольникова?
13. Як визначити кількість білка в сечі за методом Брандберга-Робертса- Стольникова?
14. Як розрахувати кількість білка методом розведення?
ХІД РОБОТИ:
I. Визначення наявності білка в сечі одним із методів. Визначити наявність білка в сечі за допомогою 20% сульфосаліцилової кислоти або проби Геллера.
II. Визначення кількості білка в сечі з 3% сульфосаліциловою кислотою на ФЕКу.
Принцип методу: При додаванні 3% сульфосаліцилової кислоти до сечі з наявністю білка відбувається згортання білка і утворюється каламутність, інтенсивність якої пропорційна кількості білка.
1. Досліджувану сечу процентрифугувати.
2. Взяти дві хімічні пробірки: перша - дослід ”Д”, друга - контроль ”К”.
3. Набрати в дві пробірки по 1,25 мл сечі.
4. В пробірку “Д” додати 3,75 мл 3% розчину сульфосаліцилової кислоти.
5. В пробірку “К” додати 3,75 мл фізіологічного розчину.
6. Вміст пробірок змішати.
7. Через 5 хвилин проводити вимірювання вмісту пробірки ”Д” на ФЕКу в кюветі на 5мм при червоному світлофільтрі проти контролю(вмісту пробірки ”К”).
8. Концентрацію білка визначити за допомогою заздалегідь побудованого калібрувального графіка, або за таблицею.
9. Схема визначення кількості білка в сечі на Феку:
| Назва інгредієнтів | Дослід, мл | Контроль, мл |
| Досліджувана сеча | 1,25 | 1,25 |
| 3% розчин сульфосаліцилової кислоти | 3,75 | - |
| 0,9% розчин натрію хлориду | - | 3,75 |
10. Занести результати в бланк аналізу.
ІІІ.Побудова калібрувального графіку.
1. Приготувати робочі розчини з 1% розчину альбуміну(стандартного розчину) за
таблицею.
| № пробір ки | 1% розчин альбуміну, мл | Ізотонічний розчин натрію хлориду, мл | Концентрація білка (С), г/л | Об’єм розведеного розчину, мл | 3% розчин сульфосаліцилової кислоти, мл | Екстинція (Е) |
| 1. | 0,05 | 9,95 | 0,05 | 1,25 | 3,75 | |
| 2. | 0,1 | 9,9 | 0,1 | 1,25 | 3,75 | |
| 3. | 0,2 | 9,8 | 0,2 | 1,25 | 3,75 | |
| 4. | 0,5 | 9,5 | 0,5 | 1,25 | 3,75 | |
| 5. | 1,25 | 3,75 |
2. Хімічні пробірки пронумерувати: 1, 2, 3, 4, 5.
3. З кожного одержаного розчину взяти в окрему хімічну пробірку по 1,25мл і додати по 3,75мл 3% розчину сульфосаліцилової кислоти.
4. Вміст пробірок перемішати.
5. Через 5 хвилин провести вимірювання на ФЕКу вмісту пробірок в кюветі на 5мм при червоному світлофільтрі проти контролю(3% розчин сульфосаліцилової кислоти).
6. Отримані результати (екстинцію) занести в таблицю.
7. На міліметровому папері побудувати калібрувальний графік. Накреслити вісь координат, на горизонтальній осі відмітити концентрацію розчинів, на
вертикальній - показники ФЕКу(екстинцію розчинів). З відміток по горизонтальній осі провести перпендикуляри, з відміток по вертикальній осі - провести лінію до перетину з перпендикулярами. Точки перетину з’єднати прямою(отримали калібрувальну криву). За калібрувальною кривою можливе визначення концентрації білка до 1г/л. При більш високих концентраціях білка вміст пробірки “Д” - дослід потрібно розвести і розведення врахувати при розрахунках.
8. Калібрувальний графік визначення кількості білка в сечі на ФЕКу, див. мал. 29 стор.109 у підручнику К.С. Плотнікова “ Практикум з клінічних лабораторних досліджень.”
Дата добавления: 2015-11-26; просмотров: 64 | Нарушение авторских прав