УО "МИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ"
Методическая разработка практического занятия для учащихся отделения «Медико-диагностическое дело» по дисциплине «Микробиология с микробиологическими исследованиями».
Тема занятия: «Экспериментальный (биологический) метод исследования»
Составила преподаватель Протько Л. И.
Минск
Тема занятия: «Экспериментальный (биологический) метод исследования»
Цели занятия:
I. Самостоятельная работа
II. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ПРАКТИЧЕСКОЙ РАБОТЕ
Экспериментальное заражение животных имеет большое значение для разных целей:
1. установление микробиологического диагноза в тех случаях, когда возбудитель не может быть обнаружен другими способами, а только воспроизведением заболевания у животного.
2. для выделения чистых культур из исследуемого материала, когда он сильно загрязнён другими микроорганизмами, например, из мокроты, гноя и т.д., при введении такого материала восприимчивому животному в его организме происходит размножение патогенных микроорганизмов, и после гибели животного можно выделить чистую культуру возбудителя заболевания
3. определение вирулентности микроорганизмов и т. д.
Большое значение имеет метод воспроизведения экспериментальной инфекции в микробиологической исследовательской работе.
Перед опытом животные взвешивают, измеряют температуру через прямую кишку. Каждое взятое в опыт животное нумеруется. До введения материала необходимо фиксировать животное в спокойном, неподвижном состоянии. Затем следует подготовить место инъекции: выстригают, выбривают или выщипывают шерсть, место инъекции дезинфицируют спиртом, йодной настойкой. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением. Материал, предназначенный для инъекции, помещают в стерильную посуду.
СПОСОБЫ ЗАРАЖЕНИЯ ЖИВОТНЫХ:
1. Введение под кожу – наиболее частый способ
2. Внутрикожный метод применяется только со специальной целью для «кожных проб»
3. Накожный способ заражения представляет собой втирание материала в выбритый участок кожи или в скарификационную кожу
4. При внутримышечном способе заражения материал вводится в мышечную ткань
5. При внутрибрюшном заражении животное держат вниз, чтобы избежать поражения кишечника иглой
6. Инъекция в ток крови производится внутрисердечно либо внутривенно
7. Заражение через пищеварительный тракт осуществляется путём примешивания заразного материала к корму или введения его животному в рот либо непосредственно в желудок через зонд. Последний способ точен.
БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ТРУПА: Трупный материал исследуют бактериоскопически, микроскопией мазков и бактериологическим – путём посевов. Для получения исследуемого материала производят вскрытие трупа. Умертвления мышей, крыс, морских свинок производят, помещая их в стеклянную, плотно закрывающуюся банку с кусочками ваты, пропитанными хлороформом или эфиром. Животные засыпают и гибнут в течение 3-5 минут. Подготовка к вскрытию: животное захватывают пинцетом, кладут брюшком вверх на деревянную доску, помещают в эмалированную кювету. Производят осмотр трупа и отмечают внешние патологические изменения, если такие имеются. Перед самым вскрытием тщательно протирают кожу дезинфицирующим раствором или обжигают шерсть пламенем горелки. Вскрытие и исследование трупа животного делится на три этапа:
1. Вскрытие и исследование наружных покровов
2. Вскрытие и исследование грудной клетки
3. Вскрытие и исследование брюшной полости
Инструменты перед вскрытием переносят из стерилизатора в стакан со спиртом и ватой на дне. Перед употреблением инструменты обжигают в пламени.
1. ВСКРЫТИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ НАРУЖНЫХ ПОКРОВОВ: делают разрез кожи по прямой линии от нижней челюсти до лобка, а затем боковые разрезы на лапках. Отпрепаровывают кожу в обе стороны от разреза. Отмечают изменения в подкожной клетчатке: расширение сосудов, кровоизлияния, отёк, состояние лимфатических узлов, делают из них мазки и посевы.
2. ВСКРЫТИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ ГРУДНОЙ ПОЛОСТИ: захватив пинцетом мечевидный отросток, делают над ним надрез, и вставив в него ножницы, перерезают с обоих сторон ребра. Откидывают грудину кверху, производят осмотр грудной полости, отмечают наличие жидкости в ней, обращают внимание на внешний вид лёгких, сердца. Производят обязательный посев крови от сердца. Для этого прижигают поверхность верхушки сердца раскалённым скальпелем и через прижжённый участок вкалывают капилляр стерильной пастеровской пипеткой. Кровь выдувают по несколько капель в пробирки с бульоном и агаром. Из оставшейся крови делают мазки. В случае надобности делают посевы и мазки из ткани лёгких, плевры, экссудата.
3. ВСКРЫТИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ БРЮШНОЙ ПОЛОСТИ производится после исследования грудной клетки. Приподняв пинцетом брюшную стенку, разрезают её ножницами от диафрагмы до лобка. Если нужно, делают посев из экссудата. Осматривают и отмечают в протоколе состояние органов брюшной полости. Внимательно осматривают печень, селезёнку, отмечают их величину, цвет, консистенцию. Вырезав кусочек селезёнки делают посев и мазки. В случае надобности делают посевы и мазки из других органов брюшной полости. Материал для посевов из органов берут следующим образом: прижигают поверхность органа и на этом месте делают разрез. С поверхности разреза соскабливают петлёй ткань, засевают её на бульон и агар. Мазки из органов готовят размазыванием по стеклу поверхностью разреза или несколько раз прикасаются поверхностью разреза, как печатью, к предметному стеклу.
Фиксируют мазки на пламени или смесью Никифорова 10-15 минут. Окрашивают мазки фуксином, метиленовой синькой и по Граму. Во время вскрытия категорически запрещается класть прямо на стол употреблявшиеся во время вскрытия инструменты. После вскрытия производят тщательную уборку рабочего места.
Фагоцитоз. Постановка опыта фагоцитоза: за 2-3 часа до опыта в брюшную полость мыши вводят 2-3 мл стерильного МПБ. По истечении этого времени в брюшной полости набирается скопление огромного количества лейкоцитов. В брюшную полость мыши вводят шприцем с тонкой иглой 0,5-1 мл очень густой суспензии физ. раствора живых стафилококков. Через 8-10 минут в брюшную полость вводят конец капилляра пастеровской пипетки и быстро набирают в пипетку мутно-белую жидкость (взвесь лейкоцитов). Из этой жидкости делают тонкий мазок на предметном стекле, высушивают, фиксируют в жидком фиксаторе. Окрашивают разведённой вдвое метиленовой синей, причём наливают краску и сейчас же её смывают. Под микроскопом в мазке обнаруживается множество лейкоцитов. В их протоплазме, окрашенной в бледно-голубой цвет, видны фагоцитированные стафилококки, окрасившиеся в синий цвет. Изменения, обнаруженные при вскрытии трупа, и также результаты вскрытия вносят в протокол по такому образцу:
1. Вид лабораторного животного
2. Время заражения (месяц, число, час)
3. Материал, применяемый для заражения
4. Время гибели животного (месяц, число, час)
5. Изменения, обнаруженные при вскрытии
6. Вид микроорганизма, выделенного из трупного материала, его морфологические, культуральные, биохимические и серологические свойства.
ЗАДАНИЕ НА ДОМ: уч. Черкес стр. 164-180
Дата добавления: 2015-11-04; просмотров: 22 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая лекция | | | следующая лекция ==> |
| | | Экспериментальный раздел работы |