Протеинурия - выделение белка с мочой в концентрациях, при которых лабораторные пробы на белок становятся положительными. В зависимости от длительности существования выделяют постоянную протеинурию, существующую в течение многих недель и даже лег переходящую, появляющуюся периодически, иногда даже при отсутствии патологии почек, например, при лихорадке и выраженной интоксикации Целесообразно различать вариабельность протеинурии: при суточной потере белка до 1 г - умеренную, 1-3 г - среднюю и более 3 г - выраженную. Принято различать следующие формы протеинурии в зависимости от места возникновения: преренальную, ренальную (почечная, истинная), постренальную (внепочечная, ложная).
Преренальная протеинурия развивается при высокой плазматической концентрации низкомолекулярного белка, который фильтруется нормальными клубочками в количестве, превышающем физиологическую способность канальцев к реабсорбции (усиленный распад белка тканей гемолиз эритроцитов).
Ренальная протеинурия может быть органической и функциональной. Органическая протеинурия возникает при поражении нефрона. В зависимости от преимущественного механизма возникновения можно выделить определенные типы органической протеинурии.
Клубочковая (гломерулярная) - обусловлена повреждением гломерулярного фильтра, в результате нарушается фильтрация и диффузия в клубочках. Она наблюдается при всех заболеваниях почек, протекающих с поражением клубочков (гломерулонефрит, амилоидоз, нефросклероз, опухоль и киста почек), при этом из крови в мочу в большом количестве фильтруются плазматические белки. Может быть селективной и неселективной в зависимости от тяжести повреждения гломерулярного фильтра.
Канальцевая протеинурия связана с неспособностью канальцев реабсорбировать плазменные низкомолекулярные белки, прошедшие через неизмененный гломерулярный фильтр. Наблюдается при приобретенных и наследственных поражениях проксимальных почечных канальцев (острый канальцевый некроз, интерстициальный нефрит).
Нефрогенная протеинурия характеризуется появлением в моче белков, происходящих из почечной паренхимы. Она не выделяется как отдельный вид, так как часто сочетается с клубочковой или канальцевой протеинурией, а минимально выраженная обнаруживается у здоровых животных (уромукоид Тамм-Хорсфолла и другие почечные гликопротеиды). Однако обнаружение нефрогенной протеинурии иногда имеет патогенетическое значение. Так, при уролитиазе с гиперфункцией паращитовидных желез в моче выявляется аномальный почечный гликопротеид, образующий «ядро» конкрементов; при нефротоксичном действии многих лекарств в моче появляется мембранный гликопротеин - белок щеточной каймы эпителия проксимальных канальцев. Механизм образования цилиндров также связан с нефрогенной протеинурией.
Функциональная протеинурия протекает без каких-либо клинических признаков, свидетельствующих о патологии почек (алиментарная, рабочая, застойная, лихорадочная, токсическая). Появление белка отмечается не во всех порциях мочи, чаще его находят в дневной моче. Протеинурия носит умеренный и чаше переходящий характер, и, как правило, не сопровождается другими патологическими изменениями в осадке мочи.
Постренальная протеинурия связана с патологией мочевыводящих путей и чаще всего обусловлена воспалительной экссудацией (пиелонефрит, цистит, простатит, пиометра). В данном случае протеинурия носит умеренный, часто переходящий характер.
Отличить истинную протеинурию от ложной можно с помощью центрифугирования и исследования мочевого осадка. Легкая форма протеинурии и большой осадок свидетельствуют о ложной протеинурии, большое количество белка и небольшой осадок указывают на заболевание почек. Присутствие гиалиновых цилиндров подтверждает ренальное происхождение протеинурии.
Важное прогностическое значение имеет определение селективности протеинурии методом электрофореза, которое помогает уточнить тяжесть повреждения клубочков. В зависимости от целостности базальной мембраны и ее способность пропускать в мочу белок различают селективную и неселективную протеинурию. Селективная протеинурия встречается при минимальном поражении гломерулярного фильтра, представлена белками небольшой молекулярной массой (альбумины, трансферрин, церулоплазмия). Неселективная протеинурия чаще встречается при более тяжелом повреждении фильтра, отличается повышением клиренса средне- и высокомолекулярных плазматических белков (в составе мочи преобладают 1,2-макроглобулин, В2-липопротеин, V-глобулины) и увеличением клиренса отрицательно заряженных белков.
Диагностическое значение имеет обнаружение в моче альбумоз (продукты распада белков), которые не встречаются у здоровых животных. Альбумозурию отмечают при различных заболеваниях, сопровождающихся усиленным распадом ткани (гангрена, плеврит, перитонит, абсцесс, рак), после инъекции животным различных сывороток, туберкулина. Для определения альбумоз пользуются биуретовой реакцией и пробой с сульфосалициловой кислотой.
Для лучшей оценки степени протеинурии определяют соотношение белка мочи (г/л) к креатинину мочи (г/л). Креатинин выводится почками пропорционально весу тела и скорости гломерулярной фильтрации. Если принять содержание креатинина за постоянную величину, то концентрация белков в моче на единицу креатинина мочи может использоваться для количественной оценки протеинурии. Если полученное соотношение не превышает 0,5-0,6, то это свидетельствует о хорошем функциональном состоянии почек. Значение от 1 до 5 указывает на возможную преренальную протеинурию с поражением клубочкового аппарата, поэтому необходимо провести исследование белковых фракций мочи методом электрофореза. Колебания показателя в диапазоне от 5 до 13 свидетельствует о гломерулярной природе поражения, более 13 - указывает на развитие амилоидом почки.
Оценку протеинурии следует проводить с учетом клинических симптомов (отеки) и остальных лабораторных показателей (уровень белка в плазме крови, соотношение альбумина и глобулина, содержание мочевины, креатинина, липидов в сыворотке крови).
Качественные методы определения белка в моче
Непременным условием при проведении исследований на белок является абсолютная прозрачность мочи. Для этого мочу фильтруют. Если мутность не устраняется фильтрованием, то применяют следующие методы удаления мутности в зависимости от причин, ее вызывающих:
Факторы, вызывающие мутность | Методы удаления |
Соли | Нагревание. Добавление кислоты или щелочи в зависимости от характера солей. |
Клеточные элементы | Фильтрование. Центрифугирование |
Бактерии | Бактериальный фильтр |
Слизь | Центрифугирование Фильтрование. |
Жир | Смешивание с эфиром |
Принцип. Способ определения белка в моче основан на коагуляции белка: под действием кипячения или воздействием кислот невидимый в моче белок становится видимым путем опалесценции, мути или белых хлопьев.
Путем кипячения В пробирку наливают4-5 мл исследуемой мочи, затем добавляют равное количество насыщенного раствора хлорида натрия и 4-8 капель 10%-ного раствора уксусной кислоты. В наклонном положении пробирки над спиртовой горелкой верхний слой доводят до кипячения. При положительной реакции в верхнем слое мочи появляется в различной степени (в зависимости о количества белка) муть. Нижний холодный слой остается для контроля.
Проба с сульфосалициловой кислотой Это самая чувствительная из качественных проб. К 5 мл исследуемой мочи добавляют 10 капель 20%- ного раствора сульфосалициловой кислоты. При положительной реакции появляется мутность, тем более выраженная, чем выше содержание белка в моче. Результат обозначают следующим образом: реакция слабоположительная (+), положительная (++), резко положительная (+++).
Определение сахара в моче
Выделение с мочой глюкозы называется глюкозурией. В моче здоровых животных содержатся незначительные следы сахара, они практически не обнаруживаются обычными качественными реакциями на сахар. В моче у животных встречаются виноградный (глюкоза), молочный и фруктовый сахар, а также пентозы, обладающие редуцирующими свойствами, на использовании которых основаны качественные методы определения их в моче. Наибольшее практическое значение в диагностике заболеваний имеет обнаружение глюкозы. Для качественного ее определения используют пробы: Бенедикта (реактив: цитрат натрия, карбонат натрия, сульфат меди, вода), Гайнеса (реактив: сульфат меди, гидроокись натрия, глицерин, вода), Ниляндера (реактив: нитрат висмута, сегнетовая соль, гидроокись натрия), Троммера (гидроокись натрия, сульфат меди), Ворм-Мюллера (реактив: сегнетовая соль, гидроокись калия, сульфат меди). Количественное определение сахара проводят: поляриметрическим методом, колориметрическим методом Альтгаузена (реактив. 10 %-ная гидроокись натрия), цветной реакцией с ортотолуидином, методом Бенедикта, пробой на брожение в сахарометре Эйнгорна и Ласар-Кона. Для идентификации отдельных видов сахаров пользуются хроматографическими методами и энзимными пробами. Существует ряд экспресс-методов обнаружения сахара в моче с применением готовых наборов (таблетки, порошки, индикаторная бумага «Глюкотест»). К этим наборам обычно прилагается описание сущности и правил проведения проб; анализ должен проводиться строго в соответствии с инструкцией.
Моча здоровых животных не содержит глюкозу, так как она, выделяясь с ультрафильтратом мочи, практически полностью реабсорбируется в извитых канальцах первого порядка. Появление глюкозы в моче (глюкозурия) зависит от концентрации ее в крови, процесса фильтрации в клубочках (гломерулярных клиренсов) и реабсорбции ее в канальцах нефрона. Установлено, что увеличение сахара в крови до 16-18 г/л всегда сопровождается выделением его с мочой. У каждого вида животных в крови для сахара существует свой «порог», выше которого при избытке почки начинают пропускать сахар в мочу.
Глюкозурия может быть физиологическая (употребление избыточного количества углеводов, при введении адреналина, волнении, испуге) и патологическая (сахарный диабет, гипо- и гиперсекреция некоторых гормонов (тироксина, АКТГ, глюкокортикостероидов, адреналина), заболевания нервной системы (бешенство, нервная форма чумы собак, длительные судороги, повреждения черепа, воспаления головного и спинного мозга, кровоизлияния в мозг), воздействие токсических веществ (окиси углерода, сулемы, хлороформа, скипидара, хлоралгидрата, адреналина, хромовой кислоты), болезни печени и почек.
Для правильной оценки природы глюкозурии получений результат необходимо сопоставлять с другими результатами анализа мочи я и крови. При высокой относительной плотности мочи, гипергликемии диагностируется сахарный диабет; при средней относительной плотности мочи и нормальном уровне глюкозы в крови - ренальная глюкозурия (дефект канальцев); при низкой относительной плотности мочи, высоком уровне мочевины в крови можно предположить острую почечную недостаточность.
Редукционные методы определения сахара в моче основываются на редукционных свойствах альдегидной группы глюкозы. В качестве окислителя берут какую-либо легко редуцирующуюся соль,дающую при восстановлении окрашенное соединение. К редукционным пробам относятся пробы Фелинга, Тромбера, Ниландера, Гайнеса.
Проба Гайнеса. Реакция основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в щелочной среде в гидрат закиси меди (желтого цвета) или в закись меди (красного цвета).
Реактив Гайнеса готовят следующим образом: 1) 13.3 г х ч. кристаллического сульфата меди растворяют в 400 мл воды; 2) 50 г едкого калия растворяют в 400 мл воды. 3) 15 г чистого глицерина разводят в 200 мл воды. Смешивают первый и второй растворы и тотчас приливают третий. Реактив стойкий.
Пробу проводят в следующем порядке: к 3-4 мл готового реактива Гайнеса прибавляют 8-12 капель мочи. Смесь нагревают над пламенем до ее закипание, а затем кипятят в течение 1-2 мин. В присутствии сахара появляются желтая или красная окраска жидкости и осадок, а при отсутствии его синий цвет реактива Гайнеса не изменяется.
Наличие большого количестве белка в моче мешает правильной оценке редукционных проб, поэтому желательно предварительно его удалить, подкислив мочу несколькими каплями уксусной кислоты, нагрев до кипения и отфильтровав.
Определение кетоновых тел
Выделение с мочой большого количества кетоновых тел называется кетонурией. Кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и В-оксимасляная кислота) являются продуктами неполного окисления жиров. При нормальном углеводном обмене В-оксимасляная и ацетоуксусная кислота окисляются почти полностью. При нарушении окисления этих веществ они выделяются с мочой вместе с ацетоном, который образуется из ацетоуксусиой кислоты в результате декарбоксилирования. Кетоновые тела в моче встречаются совместно, поэтому раздельное определение их клинического значения не имеет.
Кетоновые тела, будучи пороговыми для почечного барьера веществами, при их ретенции в крови до 10-15 мг% начинают выделяться с мочой (кетонурия). В небольшом количестве их находят у здоровых животных, но они не обнаруживаются обычными качественными пробами. Кетонурия связана с недостаточной обеспеченностью организма энергией (глюкозой), что бывает при белковом, жировом перекорме, ожирении, недостатке легкоперевариваемых углеводов в рационе, истощении и кахексии (голодные кетозы), нарушениях эндокринной регуляции метаболизма (сахарный диабет), при поражении желез внутренней секреции (гиперкортикоидизм, тиреотоксикоз), диарее, лихорадке, стрессах.
Кетоновые тела в моче встречаются совместно, поэтому раздельного их определения практически не проводят. Для качественного определения кетоновых тел используются нитропруссидные пробы (Лестраде, Ланге, Легаля, Ротзера), основанные на их взаимодействии с натрием нитропруссидом в щелочной среде, а также пробы Либена (реактив: гидроокись калия), Троммера (с салицилальдегидом). Количественные методы определения кетоновых тел в моче основаны на дистилляции кетоновых тел в специальных дистилляционных аппаратах.
Принцип Кетоновые тела в щелочной среде образуют соединения с нитропруссидом натрия, имеющие красную или фиолетовую окраску.
Проба Лестраде Для проведения реакции предварительно готовят реактив: 1 г нитропруссида натрия, 20 г сульфата аммония и 20 г безводного карбоната натрия помещают в ступку и тщательно растирают до получения мелкого однородного порошка; реактив стоек более 1 года; хранят его в тщательно закрытой стеклянной банке.
Ход определения На предметное стекло или на фарфоровую луночку наносят щепотку реактива Лестраде, к которому добавляют 2-3 капли исследуемой мочи. При наличии кетоновых тел наиболее интенсивное вишневое окрашивание наступает в течение 1-3 мин. Окрашивание смеси в красный цвет означает наличие кетоновых тел не менее 10 мг%. При более высоком содержании кетоновых тел окраска становится пурпурно-фиолетовой.
Определение крови и кровяных пигментов в моче
При патологии в моче могут быть обнаружены кровь, кровяные пигменты (гемоглобин и его дериваты, метгемоглобин, сульфгемоглобин, гемосидерин), а также мышечный белок – миоглобин. В моче часто одновременно находят кровь и гемоглобин, поэтому в пробе после оседания форменных элементов надосадочная жидкость остается красной. Если гематурия определяется макроскопически, то специальные исследования на гематурию проводить не обязательно, а при подозрении на микрогематурию проводят химический анализ и микроскопию мочевого цетрифугата. Все химические пробы на гематурию сводятся к обнаружению кровяного пигмента путем гемолиза эритроцитов и освобождения из них гемоглобина, который способен отнимать водород от органических соединений (пирамидон, гваяковая смола, бензидин,
амидопирин, о-толидин, лейкофенолфталеин) и переносить его на перекись водорода с образованием окрашенных или флюоресцирующих соединений.
Качественное определение крови и кровяных пигментов проводится с помощью бензидиновой пробы Адлер-Цитрона, гваяковой пробы Ван-Дена, ортотолидиновой реакции, пирамидоновой пробы Тевенон-Ролланда, фенолфталеиновой пробы Колло, пробы с гидроокисью калия (натрия) Геллера. Миоглобин и гемоглобин - наиболее родственные хромопротеины, поэтому химические реакции на гемоглобин дают положительный результат и на миоглобин. Методы определения миоглобина: радиоиммунный, иммуноферментный, электрофореза с сульфатом аммония. Точную дифференциацию кровяных пигментов в моче можно определить спектроскопией или спектрофотометрией. С целью количественного определения гемоглобина в моче можно воспользоваться методом Сали.
В моче здоровых животных встречаются лишь единичные эритроциты (0-5 эритроцитов в 1 мм), которые могут быть обнаружены микроскопически, химические методы дают отрицательный результат.
Гематурии бывают ренальными (почечными), постренальными (внепочечными) и смешанными. Почечные гематурии отмечаются при застое крови в почках, нефритах, нефрозах, инфаркте почек, тромбозе почечных вен, причем наличие белка в моче свыше 1 г/л и эритроцитов подтверждает ренальное их происхождение. Функциональные почечные гематурии являются следствием увеличения проницаемости почечного фильтра (перегревание, сотрясения, токсикоинфекции, рахит, бронхопневмония, лекарственная гематурия). Постренальные гематурии возникают при воспалении и травмах мочевыводящих путей (пиелит, цистит, мочекаменная болезнь, опухоли). Смешанные гематурии возникают при геморрагических диатезах (гипо- и авитаминоз С, анемия, врожденные дефекты). Ложные гематурии - результат примеси крови из половых органов. Место и причину гематурии можно определять по характеру изменения эритроцитов при микроскопическом исследовании.
Появление в моче свободного гемоглобина (гемоглобинурия) имеет место при гемолизе эритроцитов в кровяном русле - гемоглобинемии. Гемоглобинурия возникает только в тех случаях, когда уровень свободного гемоглобина плазмы превышает резервную гемоглобинсвязывающую емкость гаптоглобина. Интенсивность гемоглобинурии зависит от степени гемоглобинемии, концентрации гаптоглобина в крови и резорбционной способности канальцев почек.
Выделившийся гемоглобин реабсорбируется и окисляется клетками проксимальных отделов почечных канальцев в гемосидерин, ферритин. Нагруженные гемосидерином клетки слущиваются и выявляются в моче. Массивная гемоглобинурия и миоглобинурия, повреждая извитые канальцы, может привести к острой почечной недостаточности.
По происхождению гемоглобинурии подразделяются на симптоматическую, токсическую и параксизмальную. Симптоматическая гемоглобинурия является симптомом таких заболеваний, как ревматическая и энзоотическая гемоглобинурия лошадей, кровопаразитарных болезней (бабезиоз, пироплазмоз, нуталиоз), лентоспироз. Реже гемоглобинурия отмечается при плевропневмонии, гангрене легких, септицемии. Токсическая гемоглобинурия вызывается различными ядами, обладающими гемолитическими свойствами (бертолетовая соль, сулема, фенолы и их производные, мышьяковистый водород, сыворотка крови другого вида животного). Параксизмальная гемоглобинурия характеризуется появлением кровяных пигментов в моче периодически, приступами. В ее основе лежит длительная инфекция (инфекционная анемия и мыт лошадей), а у молочных коров - поение холодной водой. Гемосидеринурия обычно является следствием хронических гемолитических анемий, Эритробластозов, гемохроматозов.
Миоглобинурия наблюдается при тяжелых травмах, электротравмах, отравлении барбитуратами, при кормовых токсикоинфекциях. Миоглобин освобождается в кровь из поврежденной мышечной ткани. Он не окрашивает плазму, не связывается с белками крови и быстро выводится из организма через печень и почки.
Проба Колло. Перед определением в моче пигментов крови заранее готовят реактивы Колло I и Колло II по следующей прописи.
Колло I или спиртовой раствор уксусной кислоты: ледяная уксусная кислота 2 мл + спирт ректификат 96° до 100 мл.
Колло II или щелочной раствор фенолфталеина: фенолфталеин 2 мл + едкий кали 20 г + цинк металлический 10 г + дистиллированная вода 100 мл.
Принцип. Сущность обнаружения кровяных пигментов в моче химическим путем основана на пероксидазном действии гемоглобина
Ход определения Берут в равных объемах (по 2—3 мл) мочу и реактив Колло I, прибавляют 25-30 капель реактива Колло II и 2-3 капли перекиси водорода. Малиновое окрашивание смеси указывает на присутствие в моче гемоглобина. Реакция очень специфична и чувствительна.
Определение желчных пигментов
Из желчных пигментов в моче определяются билирубин и уробилиногеновые тела. Обнаружение желчных пигментов может служить диагностическим тестом при дифференциации паренхиматозной и механической желтухи от гемолитической, при которой возрастает содержание стеркобилиногена и уробилина. Совместное определение билирубина в сыворотке крови и уробилина в моче может дать более верное представление о функциональном состоянии печени животного.
Определение билирубина. В моче здоровых животных желчные пигменты обычными методами лабораторного исследования не устанавливаются. Увеличение выделения билирубина - явление патологическое и называется билирубинурией. Подобное состояние возникает в результате затруднения прохождения желчных пигментов из гепатоцитов в тонкий кишечник. Билирубинурия бывает при двух типах желтухи: паренхиматозной (острые вирусные, токсические, токсико- аллергические гепатиты, цирроз, гиппооксическое состояние) и механической (воспаление, закупорка камнем, опухолью, рубцовой деформацией). При гемолитической желтухе билирубинурия не наблюдается, поскольку с мочой может выделяться только прямой билирубин, непрямой билирубин даже при высоком содержании в крови не может пройти через здоровый почечный фильтр, будучи связан с белками сыворотки крови. Билирубинурия появляется при увеличении содержания прямого билирубина в крови выше 0,01-0,02 г/л («почечный порог билирубина»).
Для качественного определения билирубина используют методы Розина (реактив: йод), Фуше (реактив: трихлоруксусная кислота), Гаррисона-Уатсона-Хавксинсона (модификация пробы Фуше), Готфрида (реактив диазобензосульфоноловая кислота). Они основаны на свойстве билирубина окисляться в биливердин в присутствии окислителей (йод, азотистая, трихлоруксусиая кислоты). В научно-исследовательских целях количественно билирубин определяют методом Йенлрашека-Грофа в модификации Вита (реактив: хлористый кальций, этиловый спирт, диазореактивы, соляная кислота). Существует ряд «сухих» проб на билирубин («икто тест») в виде таблеток, которые могут быть использованы для качественного и полуколичественного определения билирубина в моче
Принцип Большинство качественных проб на билирубин основано на его окислении йодом, азотной кислотой и т.д. в биливердин зеленого цвета.
Проба Гаррисона-Фуше Реактивы 1) 15%-ный раствор хлористого бария: 15 г хлористого бария помещают в цилиндр вместимостью 100 мл, растворяют в 60-70 мл дистиллированной воды и доливают водой до метки; 2) реактив Фуше: 26 г трихлоруксусной кислоты помещают в цилиндр вместимостью 100 мл, растворяют в 60-70 мл дистиллированной воды и доливают водой до метки, вслед за этим приливают 1 г хлорного железа.
Ход определения. В химическую пробирку наливают 10 мл исследуемой мочи (в случае щелочной реакции мочи ее необходимо подкислить несколькими каплями концентрированной уксусной кислоты), прибавляют 5 мл 15%-го раствора хлорида бария. Содержимое пробирки смешивают и фильтруют через бумажный фильтр в другую химическую пробирку. По окончании фильтрации бумажный фильтр снимают с воронки и раскладывают на сухом фильтре, уложенном в чашке Петри. В центр фильтра, где находится осадок хлорида бария, наносят 2-3 капли реактива Фуше, При наличии билирубина появляется пятно, окрашенное в зеленый цвет.
Определение уробилиногеновых (уробилиновых) тел. У здорового животного в свежевыпущенной моче уробилиногеновые тела представлены следами стеркобилиногена, которые не обнаруживаются обычными качественными пробами. Уробилиноген в моче, будучи нестойким соединением, легко окисляется в уробилин, содержание которого в моче достигает 0.5-1,5 мг%. В настоящее время известны 4 уробилиногеновые и 4 уробилиновые фракции. Разграничение их еще не получило широкого практического применения. Групповой характер этих реакций не уменьшает их клинического значения. Уробилиногенурия и уробилинурия имеют одинаковое клиническое значение, то есть речь идет об одних и тех же основных веществах, которые встречаются в двух формах. Увеличение их концентрации в моче может быть при гемолитических состояниях (гемолитическая желтуха, гемоглобинурия, рассасывание больших кровоизлияний, обширные инфаркты миокарда), болезнях печени (гепатиты, цирроз, отравления), кишечных заболеваниях (непроходимость, энтероколиты) и лихорадочных состояниях, что связано с токсическим поражением печени. Полное отсутствие уробилина указывает на обтурационную желтуху.
Для качественного определения уробилиногеновых тел в моче применяют пробу Нейбауэра (реактив: парадиметиламинобензальдегид), для определения уробилиновых тел - пробы Флоранса (реактив: хлористоводородная кислота), Богомолова (реактив: сульфат меди), Шлезингера (реактив: ацетат цинка), Нейбауэра, Гмелина (реактив азотная или серная кислота). Обычно в лаборатории имеют дело с постоявшей мочой, поэтому практическое значение имеют вторые пробы. Уробилин определяют в первой порции мочи (как наиболее концентрированной).
Принцип реакций Качественные пробы основаны на ускорении окисления уробилиногена путем прибавления окислителя.
Билирубин и гемоглобин препятствуют определению уробилиновых тел, поэтому их предварительно удаляют: к 8 мл мочи добавляют 2 мл 10%-го раствора хлорида кальция и 2 мл 10%-го раствора аммиака. Смесь фильтруют, слабо подкисляют уксусной кислотой и затем производят определение.
Проба Богомолова (проба с сульфатом меди). К 10-15 мл мочи прибавляют 2-3 мл насыщенного раствора сульфата меди. Если появляется помутнение от образовавшейся гидроокиси меди, то прибавляют несколько капель соляной кислоты до просветления раствора. Через 5 мин добавляют 2-3 мл хлороформа и взбалтывают. При наличии уробилиновых тел хлороформ окрашивается в розово-красный цвет.
Определение желчных кислот
Желчные кислоты обладают свойством понижать поверхностное натяжение жидкости. На этом свойстве основана проба Гай-Крафта с серным цветом. Желчные кислоты содержатся в моче при механической или паренхиматозной желтухе. При длительной закупорке желчных протоков количество желчных кислот постепенно уменьшается. При гемолитической желтухе моча желчных кислот не содержит.
Проба Гай-Крафта Кислую мочу нейтрализуют добавлением едкого натра. На поверхность мочи (2—3 мл), налитой в пробирку насыпают немного порошка серного цвета. Если порошок быстро погружается на дно пробирки, то это указывает на наличие в моче более 0.01% желчных кислот. Если порошок не тонет, следовательно, желчные кислоты отсутствуют.
Определение индикана
Индикан является нормальной составной частью мочи домашних животных. В моче здоровых животных индикан обычными качественными реакциями не обнаруживается. Содержание индикана в моче зависит от вида животных и состава кормов. В моче лошадей содержание эфиросерных кислот (индикан, фенолы) может достигать 220 мг/л, крупного рогатого скота - 30 мг/л, кошек, кроликов, собак - 5-20 мг/л. Корма, богатые белками, дают больше индикана в сравнении с кормами, в которых содержание белка незначительно.
Он образуется в результате гнилостных процессов в тонком отделе кишечника и распаде белков тканей организма. Продукты этого расщепления (индол и скатол) ядовиты и окисляются в печени, образуя эфир индоксила и индикан. Значительное увеличение индикана в моче может быть кишечного и тканевого происхождения. В первом случае индикан появляется в моче при заболеваниях, связанных с застоем и разложением кишечного содержимого, особенно при развитии гнилостной микрофлоры в кишечнике (запоры, инвагинация и атония отдельных звеньев кишок, энтерит, перитонит). Во втором случае индиканурия отмечается при аутолитическом распаде тканей (гангрена легкого, распад опухолей, абсцессы, генерализованный туберкулез, гнойный метрит и мастит). Уменьшенное количество индикана обнаруживают в моче животных, больных инфекционным энцефаломиелитом, страдающих диареей различного происхождения.
Определение индикана основано на расщеплении его под влиянием кислот на индоксил и серную кислоту и переходе индоксила под влиянием различных окислителей в синее индиго, которое растворяется в хлороформе. Качественное определение индикана проводят с помощью проб Яффе (реактив: уксуснокислый свинец, соляная кислота, хлороформ, перманганат калия), Обермайера (реактив: уксуснокислый свинец, хлорное железо), цветной осадочной реакцией Кимбаровского (реактив нитрат серебра); количественное определение - реакцией по Розе, по Альтшулеру (реактив Обермайера, трихлоруксусная кислота, тимол, хлороформ)
Принцип Индикан под действием кислоты превращается в индоксил, который окисляется перманганатом калия в синее индиго
Проба Яффе Исследуемую мочу освобождают от белка и фильтруют. В химическую пробирку наливают 5-6 мл профильтрованной мочи и добавляют равный объем концентрированной хлористоводородной кислоты. Приливают 2-3 мл хлороформа. К содержимому пробирки по каплям прибавляют 2 %-ный раствор перманганата калия (избыток перманганата приводит к окислению индиго в изатин желтого цвета).
Дата добавления: 2015-11-04; просмотров: 44 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая лекция | | | следующая лекция ==> |