Koniginnenzucht biologische grundlagen 110 страница

Для вскрытия матку фиксируют брюшной стороной вниз при помощи двух энтомологических булавок в препаровальной чашке. Сначала булавкой (рис. 181, № 1) протыкают грудь. Затем вводят вторую булавку сзади в камеру жала и закрепляют последний абдоминальный стернит, слегка вытягивая брюшко на ложе.

Вскрытие брюшка производят, делая два разреза ножницами. Первый разрез (S1) идет от камеры жала с левой стороны тела между тергитами и стернитами до переднего брюшного сегмента, тергит которого отделяется вторым разрезом (S2) слева направо. Абдоминальный спинной покров затем целиком отводится пинцетом направо и закрепляется на парафиновой подушке несколькими энтомологическими булавками. Таким простым способом можно обнажить все органы брюшка в их естественном положении. Это удается гораздо лучше, чем если вскрытие производится с брюшной стороны. Дальнейшее препарирование значительно облегчается добавлением физиологического раствора поваренной соли или раствора Рингера.

Для обнажения органов головы, особенно мозга, при помощи поперечного среза удаляют часть головного хитина позади простых глазков и затем лобную часть головной капсулы до клипеуса, причем твердые относящиеся к внутреннему скелету передние руки тенториума нужно отделять очень осторожно.

В груди в первую очередь исследуют крупные выходящие из первой сегментной пары трахеи, прежде всего тогда, когда пчелиная матка больна или подозревается больной клещевой болезнью. После удаления головы и эпистернума эти трахеи легко обнажаются и отпрепаровываются для микроскопического исследования.

9.4. Гистологическое исследование

Если необходимо приготовить гистологические препараты внутренних органов пчелиных маток, их приходится фиксировать в совсем свежем (живом) состоянии. Рекомендуется эту фиксацию органов производить после сливания применявшейся при исследовании жидкости в препаровальной чашке in situ, то есть в их естественном положении. Приблизительно через 30 минут объекты освобождают от парафиновой подушки и целиком перекладывают в наполненный такой же фиксирующей жидкостью небольшой стеклянный сосуд, дно которого предварительно было уложено фильтровальной бумагой. Дальнейшее препарирование, особенно удаление хитиновых частей, лучше производить только тогда, когда объекты основательно промыты после фиксирования в 70 - 95% спирте. Обилие в органах заполненных воздухом трахей приводит к тому, что водные фиксирующие жидкости проникают в них значительно хуже, чем содержащие алкоголь смеси. Этот недостаток можно преодолеть, производя фиксацию в эксикаторе с боковым тубусом и краном при очень осторожной эвакуации.

В качестве фиксирующих жидкостей, исходя из опыта автора, рекомендуются следующие:

Гейденхайнская Susa-смесь

Состав: сублимата 4,5 г, поваренной соли 0,5 г, дистиллированной воды 80 куб. см., трихлоруксусной кислоты 2,0 г, ледяной уксусной кислоты 4,0 куб. см, формалина 20 куб. см. Продолжительность фиксации от одного до нескольких часов, затем непосредственное перенесение в 90%-ный этиловый спирт, десублимация в спиртовом растворе йодистого калия 2:3: 100.

Смесь Буэна

Состав: насыщенный водный раствор пикриновой кислоты 15 куб. см, 10%-ный формалин 5 куб. см, ледяная уксусная кислота 1 куб. см, продолжительность фиксации 2 - 3 часа, затем основательное промывание в 70% этиловом спирте.

Смесь Карноу

Состав: чистый этиловый спирт 60 куб. см, хлороформ 30 куб. см, ледяная уксусная кислота 10 куб. см. Продолжительность фиксации 1- 3 часа, затем положить прямо в 95 % или абсолютный этиловый спирт. При слишком долгом фиксировании объекты легко затвердевают и становятся хрупкими.

Смесь Леовена

Состав: 1% пикриновая кислота в абсолютном этиловом спирте 12 частей, 40% формалин 2 части, хлороформ 2 части, ледяная кислота 1 часть. Продолжительность фиксации 6 - 12 часов, затем промывание в 70 - 90% спирте.

Смеси Карноу и ван Леовена особенно пригодны для исследований гликогена.

Заливка фиксированных спиртам повышающейся концентрации, полностью обезвоженных объектов лучше всего удается через метилбензолат или бензол, в парафине (точка плавления примерно 55 - 58°С).

Выбор способа окраски зависит от того, что требуется представить или доказать. Для обзорных препаратов применяют двойное окрашивание ледяными гематоксилином Вейгерта и эозином или флоксином, а также азокарминным методом Гейденхайна.

Для выборочного выявления характерных для болезненной трутовочности маток зернистых включений наиболее пригодна, окраска по способу Манна метиленовой синью и эозином. Освобожденные от парафина в ксилоле и проведенные через спиртовые растворы уменьшающейся

концентрации в дистиллированную воду срезы выдерживают в течение часа в следующей красящей смеси:

1% водный раствор метиленовой сини 35 куб. см

1% водный раствор эозина 35 куб. см

дистиллированная вода 100 куб. см

Срезы затем хорошо прополаскивают в дистиллированной воде, ненадолго перекладывают в 70 -95% спирт и обычным способом через абсолютный спирт и ксилол заключают в канадский бальзам. Специфические зернистые включения окрашиваются в ярко-красный, ткани - в синий цвета. Если речь идет о том, чтобы в мазках или срезах ткани были отчетливо и контрастно видны бактериальные или грибковые возбудители болезни, то достигнуть этого проще всего модифицированным способом окраски по Клаудиусу. Он основан на принципе метода Грама и применяется для высушенных на воздухе фиксированных на пламени мазков или для освобожденных от парафина срезов ткани, проведенных через ряд спиртовых растворов уменьшающейся концентрации в дистиллированную воду, следующим образом: 1) окраска в отфильтрованном, 1% водном растворе метилфиолета 63: 2 - 5 минут. 2) краткое прополаскивание в дистиллированной воде, очень осторожная просушка тонкой фильтровальной бумагой; 3) травление в смеси из 8 частей полунасыщенной водной пикриновой кислоты и 2 частей 1% водного раствора истинно красного Дуро (Duroechtrot) 2 - 3 минуты; 4) быстрое промывание дистиллированной водой, снова обсушивание фильтровальной бумагой;

Дата добавления: 2015-08-28