Это плазмидные векторы, в которые встроен участок генома фага лямбда, обеспечивающий возможность упаковки целой векторной ДНК в капсид. Необходимые элементы космиды:
1. Плазмидный участок начала репликации ДНК – ori.
2. Ген-детерминант устойчивости к антибиотику.
3. По 1 месту гидролиза (узнавания) для одной или нескольких рестриктаз.
4. cos -сайт.
Космида должна иметь небольшой размер, чтобы можно было встраивать в нее фрагменты длиной более 30 т.п.н.
Принцип клонирования в космидах был впервые предложен в 1978 г. Лигированию подвергается смесь космидной и клонируемой ДНК, гидролизованых одной рестриктазой. При этом космида находится в высокой концентрации. Среди большого разнообразия продуктов лигазной реакции образуются также молекулы чужеродной ДНК, зашитые между 2-мя космидами, оба cos -сайта в них находятся в одинаковой ориентации. Когда такие молекуля инкубируются in vitro в процедуре упаковки ДНК в капсид, cos-сайты расщепляются ферментами фага с образованием липких концов, и упаковываются в капсиды. После инфекции клеток бактерии образовавшимися фаговыми частицами, ДНК попадает в цитоплазму, циклизуется с участием липких концов, и реплицируется как плазмида. Кроме того, такие космиды детерминируют устойчивость клеток к определенному антибиотику.
Дата добавления: 2015-08-27; просмотров: 98 | Нарушение авторских прав
| <== предыдущая страница | | | следующая страница ==> |
| IV. Векторы E. coli на основе нитевидных фагов | | | VI. Фазмиды |