Визначення активності каталази

Наважка тканини 1г, додали на кінчику шпателя CaCO₃ і 10 мл дист. води, розтерли і профільтрувати. Довели об’єм фільтрату до 10 мл, доливаючи воду через фільтр.

Каталазну реакцію запускали додаванням 0,1 мл гомогенату до 2 мл 0,03% розчину Н₂О₂. У холосту пробу замість гомогенату вносили 0,1 мл дистильованої води. Реакцію зупиняли через 5 хвилин додаванням 1 мл 4% розчину молібдату амонію.

Інтенсивність забарвлення холостої та дослідної проб визначали спектрофотометрично при довжині хвилі 410 нм проти контрольної проби, у яку замість пероксиду водню вносили 2 мл води.

Активність каталази визначали за формулою:

,

де, Е – різниця екстинції холостої та дослідної проб;

V – загальний об’єм суміші в кюветі;

n – розведення вихідного екстракту;

- молярний коефіцієнт екстинції комплексу Н₂О₂ з молібдатом амонію рівний 22200 М^-1_*см^-1, в розрахунках використовували величину мілімолярного коефіцієнта екстинції, виражену як 22,2 см^-1_* мкмоль^-1;

С – концентрація білка;

t – час реакції;

а – об’єм екстракту;

1 – довжина оптичного шляху.

Отримані результати виражали в мМоль Н₂О₂/хв мг білка.

Дата добавления: 2015-08-17