Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АрхитектураБиологияГеографияДругоеИностранные языки
ИнформатикаИсторияКультураЛитератураМатематика
МедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогика
ПолитикаПравоПрограммированиеПсихологияРелигия
СоциологияСпортСтроительствоФизикаФилософия
ФинансыХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника

Определение содержания общего белка биуретовым методом

Буферные системы крови | Определение гемоглобина крови | Определение протромбинового времени | Тимоловая проба | Контрольные задачи | ФУНКЦИИ И СОСТАВ ПЛАЗМЫ КРОВИ | Белковые фракции крови | Белки-ферменты плазмы крови | Главнейшие протеолитические системы крови | Система регуляции сосудистого тонуса |


Читайте также:
  1. A) определение b) обстоятельство c) часть глагола-сказуемого
  2. I. Определение сильных и слабых сторон вашего типа личности, которые могут проявиться в работе.
  3. I.3.1. Определение номенклатуры и продолжительности выполнения видов (комплексов) работ
  4. II этап. Определение рыночной стратегии
  5. II. 3. Определение потребности и выбор типов инвентарных зданий
  6. II. Измерение амплитудной характеристики усилителя и определение его динамического диапазона
  7. II. Оценка содержания жира (%) в организме мужчин в

Студент должен знать молекулярные механизмы свертывающей противосвертывающей систем крови, роль печени в этом процессе, молекулярную структуру коагуляторов, механизм гемофилий различного генеза, уметь определять биохимические показатели состояния свертывающей системы и давать им медикобиологическую оценку, знать нарушения вo фракционном составе белков плазмы крови.

Содержание общего белка в сыворотке (плазме) крови является показателем состояния человеческого организма в норме (нормопротеинемия) или нарушения белкового обмена (гипо- и редко гиперпротеинемия) при различных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, печени, сосудистой системы.

Самым распространенным химическим методом количественного определения белков является колориметрический метод, основанный на биуретовой реакции. В щелочной среде пептидные связи белка переходят в енольную форму и образуют с Cu2+ комплексное соединение, окрашенное в фиолетовый цвет.

Окраска растворов при проведении биуретовой реакции варьирует от синей до красной с преобладанием фиолетовой и зависит от количества азота, участвующего в образовании комплекса. Чтобы рассчитать концентрацию белка, строят предварительно калибровочный график зависимости интенсивности окрашивания, измеряемой на ФЭКе от заведомого содержания белка в растворе.

Оборудование и реактивы: фотоэлектрокалориметр, пробирки, пипетки, мерные колбы, раствор альбумина плацентарного 10%, сегнетова соль, медный купорос, калий иодистый, натрий хлористый, гидроксид натрия.

Готовят биуретовый реактив, растворяя в мерной колбе на 250 мл 0,375г CuSO4×Н2О и 1,5г сегнетовой соли в 150мл воды, приливая медленно 75мл 10% NaOH, и доводят содержимое до 250мл водой. Рабочий раствор биуретового реактива готовят, смешав 200 мл биуретового реактива с 800мл 0,5% раствора иодистого калия.

Построение калибровочного графика

Из калибровочного раствора плацентарного альбумина готовят рабочие калибровочные растворы, как указано в таблице:

 

№ п/п Калибровочный р-р белка (мл) 0,9% р-р NaCl (мл) Концентрация белка в г/л
  0,4 0,6  
  0,6 0,4  
  0,8 0,2  
  1,0 -  

Из каждого разведения берут 0,1 мл рабочего раствора и прибавляют по 5,0 мл рабочего биуретового реактива. Через 30 – 60 мин измеряют на ФЭКе оптическую плотность в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 540 - 560 нм (зеленый светофильтр) против контроля (к 5 мл рабочего биуретового реактива прибавляют 0,1 мл 0,9% раствора хлористого натрия). По полученным данным строят калибровочный график.

Ход работы. К 0,1мл сыворотки прибавляют 5,0 мл рабочего биуретового реактива и смешивают, избегая образования пены. Через 30 мин (и не позднее, чем через 1 час) измеряют оптическую плотность на ФЭКе, как при построении калибровочного графика против контроля (биуретового реактива).

По калибровочному графику определяют содержание белка в пробе и выражают его далее с учетом разведения в процентах в целом препарате.


Дата добавления: 2015-07-20; просмотров: 127 | Нарушение авторских прав


<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Свертывания крови и фибринолиза| Турбидиметрическим методом

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.006 сек.)