Студопедия
Случайная страница | ТОМ-1 | ТОМ-2 | ТОМ-3
АрхитектураБиологияГеографияДругоеИностранные языки
ИнформатикаИсторияКультураЛитератураМатематика
МедицинаМеханикаОбразованиеОхрана трудаПедагогика
ПолитикаПравоПрограммированиеПсихологияРелигия
СоциологияСпортСтроительствоФизикаФилософия
ФинансыХимияЭкологияЭкономикаЭлектроника

Гибридизация на чипах

Лигирование по "тупым" концам | Лигирование фрагментов с разноименными липкими, или липким и тупым концами | Генетические векторы для клонирования ДНК | Плазмидный вектор pBR322 | Введение рекомбинантной ДНК в клетки бактерий и отбор трансформантов | Гибридные векторы | Химический синтез ДНК | Секвенирование ДНК | Секвенирование ДНК по Сангеру | Молекулярная гибридизация |


Читайте также:
  1. Гибридизация нуклеиновых кислот на твердых подложках
  2. Молекулярная гибридизация

Одним из наиболее точных и современных методов анализа является использование чипов. Они представляют собой пластинки с иммобилизованными мечеными ДНК-зондами. Каждая такая пластинка может содержать несколько десятков тысяч зондов, расположенных в определенной последовательности. Метка проявляется только в спаренных двухцепочечных фрагментах. Если в исследуемом образце есть последовательности, комплементарные последовательностям зонда, то гибридизацию можно определить визуально или с помощью специальных приборов. Как правило, детекторы соединены с компьютером, то есть процедура считывания и обработки информации автоматизирована.
Такие ДНК-чипы можно применять для комплексной диагностики инфекционных заболеваний, наследственных дефектов, установления экспрессии тех или иных генов (в этом случае идет гибридизация с мРНК, или кДНК, полученных на мРНК), то есть отслеживания нарушений обмена веществ.

Как исследовать, действительно ли ген существует, то есть транскрибируется ли данный участок ДНК? Для этого ген представляют в чипе частью его последовательности – олигонуклеотидом, который иммобилизован в микроплощадке с определенными координатами на этой матрице (рис. 42 – 1). Этот олигонуклеотид соответствует части экзона, предсказанного компьютером на основе сиквенса геномной ДНК. Чтобы выяснить, действительно геном в данном участке транскрибируется, берется клетка и из нее выделяется суммарная РНК(рис. 42 – 2). Из всех этих молекул РНК получают ДНК-копии, которые флуоресцентно метят и проводят гибридизацию с иммобилизованными на микрочипе олигонуклеотидами (рис. 42 – 3, 4). Если в данных условиях какие-то площадки с олигонуклеотидами «молчат» (они показаны черным), то это значит, что участок геномной последовательности, комплементарной этому олигонуклеотиду, не транскрибируется. Если же площадка матрицы «светится», значит олигонуклеотиды в этой площадке прогибридизовались с флуоресцентно меченым продуктом, то есть соответствующий участок генома транскрибировался и действительно является частью какого-то гена (рис. 42 – 5).

Рис. 42. Схема анализа последовательностей нуклеотидов с помощью ДНК-чипов.

Биологические микрочипы могут быть использованы для установления относительного уровня экспрессии в клетках различных типов для выявления органоспецифических различий (печень – почки), патологических (норма – опухоль), онтогенетических (зародыш – взрослый организм).


Дата добавления: 2015-11-16; просмотров: 44 | Нарушение авторских прав


<== предыдущая страница | следующая страница ==>
Гибридизация нуклеиновых кислот на твердых подложках| Полимеразная цепная реакция

mybiblioteka.su - 2015-2024 год. (0.006 сек.)