Экспериментальный протокол к уроку 3

1. Подпишите фломастером микроцентрифужную пробирку (напишите на ней «+» и вашу фамилию)
2. Выньте две ваши жидкие культуры из качалки или из термостата и посмотрите на них при дневном свете и под ультрафиолетом. Посмотрите, есть ли разница в цвете. С помощью чистой пипетки перенесите все содержимое (2 мл) культуральной пробирки, помеченной «+», в микроцентрифужную пробирку, которую вы подписали и закройте ее. Культура, помеченная «-» вам не понадобится.

1. Центрифугируйте микроцентрифужную пробирку 5 мин на максимальной скорости. Убедитесь, что вы правильно уравновесили пробирки в центрифуге. Если вы не знаете как правильно это делать, обратитесь к преподавателю.

1. После центрифугирования откройте пробирку и осторожно слейте прозрачную надосадочную жидкость (супернатант). На дне пробирки должен остаться заметный осадок, состоящий из бактериальных клеток.

1. Посмотрите на осадок под ультрафиолетом. Запишите ваши наблюдения.
2. Чистой пипеткой добавьте 250 мкл буфера ТЕ в пробирку. Тщательно ресуспендируйте бактериальный осадок, гоняя раствор в пипетке туда-сюда. Не должно остаться ни одного комочка клеток.

1. Используйте промытую пипетку, добавьте 1 каплю лизоцима к ресуспендированному осадку. Закройте пробирку и перемешайте содержимое, встряхивая ее указательным пальцем. Лизоцим начнет расщеплять клеточные стенки бактерий. Пронаблюдайте за пробиркой под ультрафиолетом. Поместите микроцентрифужную пробирку в морозильник до следующего занятия. Замораживание приведет к полному разрушению клеток.

Вопросы к уроку 3

1. Вы используете бактерий, чтобы наработать зеленый флуоресцентный белок. Назовите функцию оборудования и материалов, которые вы использовали на уроке 3

А. Центрифуга

Б. Лизоцим

В. Морозильная камера

1. Объясните, почему обе («+» и «-») жидкие культуры флуоресцируют зеленым под ультрафиолетом?

1. Почему вы отбросили супернатант на этой стадии очистки белка?

4. Объясните, почему бактериальная клеточная стенка рвется при замораживании. (подсказка: что происходит с закрытой бутылкой воды, если ее заморозить?)

5.Какова цель разрушения, или лизиса бактерий?

Дата добавления: 2015-08-10