Читайте также:
|
10.0 mL синтетичного водного зразка був pipetted в
, 25-mL відкалібрував флягу, 1.0 mL potassium dihydrogen
рішення (pH 7.2) буфера натрієвого для фосфату гідрата було додане,
і рішення було розбавлене з водою до 17 mL. Згодом,
2.5 mL рішення (0.005%) VB4R був доданий, і це рішення
був розбавлений з водою до марки. Після змішування і анулювання
рішення впродовж 20 хвилин, інтенсивність RRS, ¢я, була зважена в
ìex) ìem) 523 нітрометан. Результати показуються в Таблиці 4. Родич
середнє квадратичне відхилення (RSD) було між 0.84 і 3.04%, і
одужання було між 94.8 і 103.5%.0
B. Визначення Гепарину в Зразки Ін'єкції
Натрію Гепарину 1
. 0.5-mL порція ін'єкції натрію гепарину склала
pipetted в 100-mL відкалібрував флягу і був розбавлений до марки
з водою. 2.0-mL порція цього рішення гепарину склала
pipetted в 100-mL мірній колбі, а потім розбавив
, 1
відмічають з водою. 1.0-mL кількість цього рішення була pipetted
,1
в 25-mL калібрує флягу; наступна процедура та
ж 1
, як вище. Результати і одужання вносяться в список в Таблицю 5. 1
RSD для трьох зразків між 1.8 і 3.5
Механізм Reaction і Причина
Збільшення 1
РЕАКЦІЇ на опромінення. Структури трьох барвників вносяться в список в Таблицю 6. Вони
reaction механізм з гепарином і причина
збільшення 1
з РЕАКЦІЙ на опромінення є як зазначено нижче:
A. Обов'язкові Розташування Гепарину з Катіоноактивними Барвниками.
Гепарин має три o-sulfate групи, дві N-sulfate групи, і два
carboxyl група за tetrasaccharide одиницю. O-sulfate і
N-sulfate група повністю роз'єднують, навіть нижче pH 3.0. 1
carboxyl група квола кислий, і pKa d-glucuronic кислоти
в Hep складає 3.6. Carboxyl групи не можуть роз'єднати повністю
Table 6. Structure of Dye and Substituting Groups
до вище за pH 5.0.25 залежність RRS інтенсивності
комплексу барвника гепарину від pH була знайдена експериментально. 1
результат показав, що інтенсивність RRS дуже слабка, коли кислотність
був вищий (2 молекулярна маса/L HCl), і що Hep важкий, щоб комбінувати
з барвником. За таких умов, не лише може carboxyl групи
, які 1
не роз'єднують, але і o-sulfate і N-sulfate групи складають
приєднана протон молекула, яка втрачає їх електростатичний
атракціон до катіоноактивний барвник R, що стає. До того ж, R може також скласти
приєднано протон, щоб стати удвічі-зарядженим іон HR2, і його поверхня
, 1
charge щільність підвищена. Тому, його hydrophobicity складає
зменшують, який призводить до існування
реакції асоціації 1
важкий для обробки. Коли pH підвищений вище за 3.0,
o-sulfate група, N-sulfate групи, і частина carboxyl груп
роз'єднують в аніонах, HR2 стає R, і комбінація
Hep з барвником поступово зростання, який призводить до gradual
збільшення РЕАКЦІЙ на опромінення, досягаючи константи
Фігура 4. Ескіз, що ілюструє комбінацію гепарину з катіоноактивним барвником (R).
Фігура 5. Поглинювальні спектри VB4R у водному рішенні. Концентрація VB4R: 1, 3.85 10-6 молекулярна маса/L; 2, 9.61 10-6 молекулярна маса/L; 3, 1.92
10-5 молекулярна маса/L; 4, 3.85 10-5 молекулярна маса/L; 5, 5.77 10-5 молекулярна маса/L; 6, 7.69 10-5 молекулярна маса/L.
B. Держава Катіоноактивного Барвника, що Зв'язує Гепарин. Загалом,
катіоноактивний барвник прагнуть залучити в концентраційному діапазоні користувався
(10-3-10-6 молекулярна маса/L), який призводить до dimer освіти. У цьому
концентраційний діапазон, головним чином monomer-dimer рівновага існує.27
, Якщо рівновага держави скупчення піклується до утворення
мономера в рішенні, поглинювальний пік буде переміщений до
червоної довжини хвилі від блакитних довжин хвилі; якщо скупчення
державна рівновага піклується до утворення димера і навіть higherorder
сукупність, поглинювальний пік переміститься до синяви
довжина хвилі від червоних довжин хвилі, і спектральної поглинальної здатності
відповідні пікові зростання.28 зростання в концентрації
з VB4R, VBB, або В північному напрямі у водному рішенні сприяючий до
утворення димера, але розбавляючи рішення, сукупність
поступово deaggregate до мономера. Поглинювальні спектри
з VB4R у водному рішенні записав як функція барвника
, 1
концентрація показуються у Фігурі 5. Від Фігури 5 це може бути новий пік в 569 нітрометані - характерне значення димера.
За експериментальних умов, це було знайдене, що, коли
концентрація барвника нижча і головна держава барвника - мономер
(R), RRS інтенсивність комплексу hep-dye висока; проте,
далі, збільшуючи керівництво концентрації барвника до зменшення
інтенсивність RRS. Тому, це inferred, що dimer форма складає
не прибутковий до комбінації барвника з гепарином. Причини
є як зазначено нижче: 1. Оскільки там існує конкуруючу реакцію
між комбінацією R з гепарином і скупчення
з R безпосередньо, збільшуючи концентрацію R призводитиме до
збільшення скупчення і зменшення ефективної концентрації R
; тому, несприятливий до комбінації R
з гепарином. 2. Dimer структура не паралельна. Там існує
відстань і кут між мономерами в димері, 29 і
. об'єм димера більший, веде
Фігура 6. Rayleigh Resonance, розсіювальний спектр і поглинювальний спектр heparin-VB4R комплексу: 1, для resonance Rayleigh, розсіювального
спектр, pH 7.2, VB4R, 9.61 10-6 молекулярна маса/L, гепарин, 10.0 íг/25 mL; 2, для поглинювального спектру, pH 7.2, VB4R, 9.61 10-6 молекулярна маса/L, гепарин,
5.0 міліграма/25 mL.
Фігура 7. Coplanarity зміна молекули VB4R до і після комбінації з гепарином.
трудність в закритті до аніонних груп гепарину, тому,
трудність у формуванні комплексу hep-dye. Зроблено висновок, що
держава барвника, комбінованого з гепарином, - мономер.
C. Relation між RRS і Поглинювальними Спектрами.
, Тому що РЕАКЦІЇ на опромінення - поглинювальний повторно розсіювальний процес, вироблюваний, коли
резонанс має місце між Rayleigh, розсіювальним і
легке поглинання з рівною частотою, упевнено, що РЕАКЦІЇ
на опромінення 1
спектральні характеристики близько пов'язані з поглинанням
спектр. Фігура 6 порівнянь RRS спектр комплексу Hep-VB4R
з його поглинювальним спектром. Це показується у Фігурі 6 що RRS група спектрів комплексу розташована в нім
поглинювальна група і що ìмаксимум РЕАКЦІЙ
на опромінення 1
і інші піки РЕАКЦІЙ на опромінення - увесь
розміщено біля відповідних поглинювальних піків, які мають добре
кореспонденцію. Наприклад, чотири піки РЕАКЦІЙ на опромінення, 523, 269, 359,
і 399 нітрометану, відповідають їм чотирьом поглинювальним пікам, 513, 256,
345, і 387 нітрометану. RRS shift червоний колір піків 1014 нітрометану, порівняв
з їх поглинювальними піками. Цей результат може бути пояснений в цьому
, коли складна молекула абсорбує енергію специфічної довжини хвилі,
його електрон схвильований до вищого вібраційного рівня
електронний збуджений єдиний стан. Потім електрон швидко процеси
Фігура 8. Поглинювальні спектри гепарину і heparin-VB4R комплекс у водному рішенні: 1, гепарин, 5.0 міліграма/25 mL, pH 7.2; 2, гепарин-
комплекс VB4R, гепарин 5.0 міліграма/25 mL, pH 7.2, VB4R, 9.61 10-6 молекулярна маса/L.
D. Причини Збільшення РЕАКЦІЙ на опромінення. 1. Барвник, що зв'язує
результат гепарину у збільшення його coplanarity і жорсткість,
який сприятливий до зростання РЕАКЦІЙ на опромінення.
, Коли RRS xanthane барвників як fluorescein і rhodamine
B порівнюються з тими з барвників triphenyl метану як наприклад
phenolphthalein і блискуча зелень, 18,21,30 це може бачитися, що
РЕАКЦІЯ на опромінення fluorescein і rhodamine B сильні, але RRS
phenolphthalein і блискуча зелень дуже слабкі, хоча вони
структура подібні до тих з fluorescein і rhodamine B.
, Їх різниця є головним чином це там існує oxo міст між
два група феніл для творець, і xanthenyl знаходиться
такий же літак; тому, молекула має дуже хороший coplanarity
і жорсткість. Проте, три групи фенілу для останнього можуть
обертають до деякої міри. Так само, у вивченні RRS іона
комплекс асоціації легкова автомашина з відкидним верхом 4R, ми виявили, що, тому що
з удосконалення coplanarity і жорсткість, RRS
іона група зв'язалася з oxo мостом. Коли катіоноактивний барвник R близький
до гепарину, із-за електростатичних атракціонів позитиву
навантаження барвника і негативне навантаження гепарину і
гідрофобної взаємодії між обома (гепарин має гідрофобний
структура, і катіоноактивний барвник має гідрофобний багатофеніл
тіло), барвник об'єднує з гепарином, щоб стати heparindye
комплекс, який подібний до взаємодії гепарину з
деякі катіоноактивні сурфактанти, як наприклад хлорид Zephiran.32 В цьому випадку,
молекула барвника binds на поверхні гепарину завдяки
негативному для позитиву електричному полю. Крім того, космічне утруднення
з аніонної групи гепарину розмістив між обома феніл
група барвника обмежує обертання двох груп фенілу.
, Беручи -O-SO3
- гепарину як приклад, ми вичислили
coplanarity зміна молекули VB4R до і після
комбінації з гепарином, користуючись AM1 методом кількісного
хімія. У результатах показано кут завихорення між двома групами фенілу крапає до 8.3°. Це
виникають показує, що це його coplanarity зростає дуже. Кути
завихорення 1
з naphthyl з двома групами фенілу також крапають до 52.8° і 80°,
відповідно, показуючи, що це їх coplanarity також був вдосконалений
до деякої міри. Запропоновано, що подібна зміна може
також мають місце, коли R зв'язується з -NHSO3
- і -COOof
гепарин; тому, ми думаємо, що удосконалення coplanarity
і жорсткість молекули буде прибуткова до збільшення
з РЕАКЦІЙ на опромінення.
2. Скупчення chromophores катіоноактивного барвника
на біологічній макромолекулі дуже збільшить інтенсивність з РЕАКЦІЙ на опромінення після комбайнів катіоноактивного барвника з гепарином. Хоча це
- макромолекула, гепарин безпосередньо не містить сполучений
система, і це не показує поглинання від near-ultraviolet
до видимих регіонів. Тому, неможливо для цього робити
очевидна РЕАКЦІЯ на опромінення. Проте, комбінується з катіоноактивними барвниками
як наприклад VB4R, багато chromophores барвника залучені
на молекулі гепарину, отже роблячи комплекс
барвника гепарину 1
стає суміш з інтенсивним легким поглинанням (см Мал.
8. Його максимальна поглинювальна довжина хвилі знаходиться в 576 нітрометані). Оскільки це
- молекула з великою сполученою системою і з багатьма сильними
auxochromes, корінна абсорбуюча здатність барвника висока (1
105 молекулярної маси L-1 см-1), 33,34 який призводить до комплексу
барвника гепарину 1
, маючи велике значення. Від теоретичних лікувань,
інтенсивність RRS було вичислено, щоб скласти 35
Коли інші умови постійні, зі збільшенням в
корінній абсорбуючій здатності молекули, інтенсивність розсіювання
збільшує; тому, коли макромолекула без поглинання
від near-ultraviolet до видимих регіонів стає тим з
верхнє значення, інтенсивність RRS буде дуже збільшена.
Отже, скупчення катіоноактивного барвника на гепарині - інше
важлива причина для збільшення RRS.
ПІДТВЕРДЖЕННЯ
Цей проект підтримує Національний Бекар
Дата добавления: 2015-12-08; просмотров: 85 | Нарушение авторских прав